基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱是近年来发展很快的一种新颖的质谱分析仪,尤其适用于生物大分子的分子量测定.本文介绍它在确证化学合成醉母转录活化因子的一级结构中的重要作用.
　　质谱分析是一种灵敏、准确和快速的分析方法,近年来一系列新的解吸电离技术不断涌现,日趋成熟,可测分子量范围越来越宽,并逐步适用于难挥发、热敏感物质的分析.这些新颖电离方法主要有:快原子轰击电离、电喷雾电离,以及基质辅助激光解吸附电离等.它们在多肤、蛋白质、低聚糖、低聚核昔酸等生物分子的一级结构分析上起着越来越重要的作用;这一不断发展和完善的分析技术已经成为生命科学中必不可少的分析手段.
　　基质辅助激光解吸附电离是利用基质分子吸收了N:激光(337om)或其它激光的能量转化为系统的激发能,导致难挥发样品分子的电离和气化,再与飞行时间(TOF)或离子回旋共振(ICR)质量分析器相结合,,能够分析分子量在一万以上的生物大分子.对于飞行时间分析器,理论上对测量质量范围没有限制,根据下面的公式:l/2mvZ=zE又v~d/t所以m/z一ZEtZ/少=kt,(k=ZE/d,为常数)(式中E为加速电场强度,d为最后一个加速栅极到检测器间的长度)测量时间越长,则可测量的m/z越大.
　　MALDI是一种软电离方法,能将极大的生物分子电离,给出分子离子峰,同时会伴随产生M'一以及ZM一等离子峰.因它不使分子碎裂分解,所以谱图很简单,分析时间也很短,从而促进了固相法合成多肤的应用.因为由于固相法合成肤本身存在的方法学上的问题,不可避免地产生缺失肤等副产物;当合成的肤较大时,产物的组成往往比较复杂,给固相法合成多肤的应用带来很大的限制.在合成肤的序列已知的情况下,通过对经高效液相色谱分离的产物各组分进行质量分析,往往是快速、简便确定合成肤结构的最有效方法.目前在国内,对于有一定质量范围限制的FAB一MS来说无疑是一个重要的补充.
　　实验部分质谱分析实验实验在型质谱仪上完成,离子线性飞行距离65.m,N:激光器(激光波长337nm),质谱信号为50~100次单次扫描的累加,加速电压25kV,检测器电压1.85kV.将基质与样品等体积混合液滴加在金属靶盘上,自然挥发至干,然后将金属靶盘放入离子源内进行分析.
　　对称酸醉法接肤(其中Arg、Gln、Asn用DCC/HOBt法),溶剂为CHZC12.肤链从树脂上的切落以及各种侧链保护基的脱除采用"低一高"无水HF切割,得到的粗品肤用二硫苏糖醇(DDT)还原后应用半制备型反相高效液相色谱(RP一HPLC)柱进行制备纯化.
　　二聚体的制备经纯化后,质谱确认的样品,在缓冲溶液中,进行空气氧化,用分析型柱拼监测反应,半制备型柱纯化制备.
　　结果与讨论用空气氧化法将单体中Cys残基上的一SH氧化为二硫键而形成二聚体.整个反应过程用分析型RP一HPLC柱进行监测,随着单体所对应的峰逐渐降低.出现的新峰逐渐增高,收集此峰.在m/z7033.7处出现分子离子峰,因为飞行时间质谱仪测量质量有一定的误差范围,在0.4%以内的误差都是允许的,所以我们认为离子峰与理论值m/z7005.8是符合的;单体基本上没有产生离子,因此我们说确是二聚体的分子离子峰.然而离子很强,我们考虑可能是由于二聚体极易产生的缘故.这样,单体的氧化产物经质谱分析确证为是二聚体.

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