实验部分主要的仪器和试剂IFFL-D型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈科技电子设备有限公司);蠕动泵(30r/min,上海仪表电机厂);八通阀(温州市龙方仪器配件厂);聚四氟乙烯管(内径0. 8mm,用于连接阀与流路中的泵管);盐酸洛贝林标准品(北京市燕山制药厂提供),其储备液实验前先配好,使用时用二次水逐级稀释至所需浓度;盐酸洛贝林注射液(标示量3mg/mL,上海通用药业有限公司);十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)(上海润捷化学试剂有限公司);四氯络金酸(上海试剂一厂):用二次蒸馏水配成1. 00×10-2g/mL的氯金酸储备液;盐酸(重庆无机化学试剂厂);无水碳酸钠(上海虹光化工厂);氢氧化钠(重庆化学试剂总厂);鲁米诺(德国Merck公司)储备液: 0. 01 mo.l /L(含0. 30MNa2CO3缓冲溶液, pH=11. 5)鲁米诺逆胶束溶液:取一定量的鲁米诺储备液加入到体积比为4: 6的二氯甲烷-环己烷混合溶液(含有浓度为0. 1 mol/L的CTAC)中振荡1 min,静置15min得到浓度为5. 0×10-5mol/L的鲁米诺逆胶束溶液;以上试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。
实验方法标准曲线绘制分别移取一定体积的盐酸洛贝林标准储备液于一系列的25 mL具塞比色管中,分别加0. 8 mL1. 0×10-3g/mL的四氯络金酸储备液和0. 9 mL的1mol/L盐酸储备液,用水稀释至10 mL标线,摇匀,得到不同浓度的系列标准液。然后向各比色管中加入6 mL的二氯甲烷萃取,收集有机相,按图1所示装置装好流路(阀池距为8 cm),开启蠕动泵(单管泵速2. 5 ml/min),待基线稳定后进二氯甲烷萃取物进行测定,以峰高定量,同时用二次水为试剂空白,进样体积为160μL。
制剂中盐酸洛贝林的测定分别取不同批次的针剂各10支,混合后再分别移取相当于1支针剂的体积(1 mL)于100 mL容量瓶中,稀释后用本法测定。
结果与讨论盐酸浓度对化学发光强度的影响由图2可知,在未加入盐酸的情况下,由于不能产生能进入水池的离子缔合物:盐酸洛贝林·H+·AuCl4-·nH2O,而随二氯甲烷进入逆胶束水池中的AuCl4-非常有限,故只能产生很小的试剂空白信号,随着盐酸浓度的增加,所形成的离子缔合物将大量的AuCl4-载入逆胶束水池中,化学发光强度也随着增大,当盐酸浓度达到0. 05mol/L时发光强度达最大值,超过这一浓度信号反而下降,可能是因为少量气态的HCl被带入了水池,从而破坏了逆胶束中适合鲁米诺反应的pH值环境的缘故[5]。故本实验选择0. 05 mol/L的盐酸作进一步的试验。
四氯络金酸浓度影响研究发现,在没有四氯络金酸存在的条件下,无法观察到化学发光,然而无论有无盐酸洛贝林,体系都能产生化学发光,究其原因,可能是因为在酸性条件下H+·AuCl4-·nH2O能被二氯甲烷萃取,所以我们用没有盐酸洛贝林存在时的发光信号作为空白值,研究四氯络金酸浓度对发光强度的影响。实验结果表明,随着四氯络金酸浓度的增大,化学发光强度也逐渐增强,这表明被带入水池中的四氯络金酸的量在不断增大,当四氯络金酸的浓度为80μg/mL时,发光信号值较大,且信号的重现性好,故实验选择四氯络金酸的浓度为80μg/mL。
水与表面活性剂摩尔浓度比R值的影响R值,即逆胶束体系中水与表面活性剂摩尔浓度之比:
它是逆胶束的一个非常重要的物理化学特性参数,R值的变化直接影响到逆胶束“水池”体积的大小和其它理化性能[4],我们可以通过调控[H2O]与[CTAC]比值来调控R值。我们研究了在鲁米诺的浓度为5. 0×10-5mol/L的条件下,固定水量(用0. 30 mol/LNa2CO3作缓冲溶液,调节鲁米诺溶液的pH值为11. 5左右),通过改变表面活性剂的浓度来获取不同R值时的化学发光信号,实验表明,当R为11的时候,发光强度达到最大,随后就下降了,如保持表面活性剂的浓度不变,改变水的含量,在研究中发现化学发光强度与R值的关系与前者的变化情况相一致。开始时,增大R值,化学发光强度有明显的提高,然而随着R的进一步增大,逆胶束的体积势必要增大,最终将导致逆胶束的不稳定。考虑到信号值的大小并兼顾逆胶束的稳定性,本实验选择0. 1 mol/L的CTAC和1. 1 mol/L的水作为最优浓度,此时的R值为11。
实验还表明,保持R值为11时,化学发光强度随着表面活性剂和水的浓度的增大而增强,这可能是因为逆胶束的体积不变,但是逆胶束数量增加的缘故,但随着CTAC浓度的进一步增大,逆胶束将会变得太粘稠而无法使用。
制剂中盐酸洛贝林的测定将本法用于针剂中盐酸洛贝林的测定,并且与药典规定的方法进行对照[2],结果如表1所示,可以看出,本法获得的结果与药典法吻合。
测定方法与药物的关系在对本法的研究中,我们有选择性的测定了20种药物,通过大量实验,我们提出只有那些能同时满足以下条件的药物可成功测定: 1.该药物必须溶于水。因为质子化是在水溶液中进行的,所以这是能否测定的必要条件; 2.该药物分子结构中必须含有易于被质子化的N原子(该药物所对应的共轭酸的pKa〉7,或本身就是季胺盐); 3.质子化的分子与AuCl4-形成的离子缔合物能有效的被组成逆胶束的某种溶剂所萃取,且该萃取剂不能破坏逆胶束的稳定性。
在我们选择性的测定的20种药物中,成功的测定了如下12种药物:硫酸阿托品、东莨菪碱、盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、盐酸小檗碱、硫酸奎宁、盐酸洛贝林、盐酸哌替啶(杜冷丁)、盐酸利多卡因、亚甲蓝、硫酸长春新碱、马来酸氯苯那敏(扑尔敏)。这些被成功测定的药物都能同时满足上述三个条件,它们在水中较易溶解,在氯仿中(下转第85页)82四川教育学结果输出是比较重要的一个模块。用户可以根据自身需要选择须打印的处理报表。该模块中还内嵌了每种报表的自定义设计功能,可以根据要求设计不同样式的报表。统计报表的汇总打印,不仅规范了实验室的管理,还有助于教学评估中相关统计表的自动生成。
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