禽大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌(E. coli)引起的禽类不同类型疾病的总称.包括急性败血症、肉芽肿、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、眼炎、关节炎、脐炎以及肺炎等,最常见的是急性败血症和卵黄性腹膜炎,给养禽业造成严重的经济损失.抗生素和化学药物的饲料预防和治疗已引起严重的抗药性,给西药治疗造成难以回避的困难.从整体上看,抗生素的正确使用是建立在对病原菌选择性毒性和敏感性上的,所以筛选敏感药物,开发新的抗生素,寻求抗生素有效替代品,都是防治细菌性疾病的长期任务.益生素作为抗生素替代品,用于调节肠道微生态,并进行了大量试验,收到良好效果,虽然它对病原菌不产生抗药性,但其对抗生素和化学药物的敏感性直接影响持续使用效果.
　　本试验研究大肠杆菌对抗生素和化学药物的敏感性,以筛选敏感治疗药物.同时比较药物对益生素菌种的敏感性,探讨药物治疗大肠杆菌病对肠道微生态可能造成的影响.
　　材料与方法.试验材料.试验菌株大肠杆菌CVCC249、沙门氏杆菌C79-13;嗜酸乳杆菌SM0101(本试验室保存菌株).以109cfu/mL作为药敏试验菌浓度.
　　培养基LB培养基、MRS培养基(嗜酸乳酸杆菌专用),过滤灭菌.
　　抗生素和化学药物球痢灵、地克珠利(抗球虫药);金刚烷胺(抗病毒);金霉素、杆菌肽锌、呋吗唑酮、喹乙醇、洛克沙胂(饲料药物添加剂)、小蘖碱;吡哌酸、硫酸阿米卡星、链霉素、青霉素钠、氯霉素、乳酸诺氟沙星、复方新诺明(治疗药物).
　　治疗抗生素.硫酸阿米卡星、硫酸新霉素、氯霉素、庆大霉素、乳酸环丙沙星、乳酸诺氟沙星、痢菌净、硫酸粘杆菌素.
　　上述药物溶于少量的适宜的溶剂中,配成1280μg/mL无菌溶液,并用细菌过滤器过滤除菌,分装至无菌小管中,在-20℃冷冻保存,供药敏测定用.
　　试验方法.试管二倍稀释法.排列具棉塞的无菌试管,每种药物一列,一列13管.将上述菌液用LB培养基1:10000稀释,取1.8mL加入第1管,第2~13管各加入1mL.再将0.2mL的3.1组药物原液加入第1管中,混合后吸出1mL加入第2管中,用同法依次二倍稀释至第12管,弃去1mL;第13管为生长对照,则各管的浓度依次为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125和0.06μg/mL.37℃摇床振荡培养12h,然后观察结果.以无细菌生长的最低浓度为最低抑菌浓度(MIC).
　　试管稀释涂布法.排列具棉塞的无菌试管,每种药物一列,一列10管.0.8mLLB滤液为第1管,其余9管1mLLB;加3.2组抗生素原药液0.2mL于第1管,以二倍稀释到第9管,第10管为无药对照管.
　　每个试管中均含有1mL不同稀释度的药液,然后取100μL1000倍稀释菌液注入每个试管中,37℃振摇培养12h,观察结果,完全清晰无细菌生长,底部无沉淀的试管即为对该菌株的最低抑菌浓度(MIC).
　　由于有些药物的色泽判断较难,故先用试管稀释法初判MIC,再每管取100μL对应加入LB平板,涂布,重判MIC.本试验重复三次,结果取平均值或重复值.
　　结果与分析.不同菌株对抗生素和化学药物的敏感性大肠杆菌和沙门氏杆菌作为病原菌以及有益菌的代表乳杆菌SM0101,对目前广泛使用的药物都有一定的抗药性.
　　饲料药物添加剂中,常用的抗球虫药物添加剂球痢灵、地克珠利、抗流感病毒的金刚烷胺对三菌都无作用,属于天然抗药性.杆菌肽锌、喹乙醇、金霉素、小蘖碱、已被禁用的促生长的有机砷制剂---洛克沙胂是最常用的促生长添加剂,对两病原菌无效,却对乳杆菌抑制强烈.说明长期连续使用的药物添加剂已使两病原菌产生明显的抗药性,却对外源的益生素乳杆菌很敏感,这提示使用乳杆菌时,不可同时使用敏感药物添加剂.
　　治疗药物中,吡哌酸、乳酸诺氟沙星、氯霉素、阿米卡星、青霉素钠对大肠杆菌、沙门氏杆菌的抑制效果较好,但MIC也比较高,且SMZ、呋吗唑酮、链霉素已表现出抗药性,说明不合理用药和长期用药,使敏感药物失效,影响到细菌性疾病的治疗.
　　治疗药物同时对乳杆菌等正常菌群也有强烈抑杀作用,乳杆菌具有相近药物敏感性,尤其对饲料中药物添加剂敏感性较强.说明,不管饲料添加剂还是治疗药物,在作用于病原菌的同时,不可避免地破坏正常菌群和微生态平衡,所以微生态的调理和增强机体免疫力是预防细菌感染的根本,也是抗生素治疗后恢复正常菌群的根本,抗生素治疗要适时足量平抑病原菌,尽可能避免造成微生态新的失衡.
　　传代大肠杆菌O1对庆大霉素的MIC变化高浓度庆大霉素传代,开始3~8代菌浓波动,到20代菌浓很高,达到108以上,似乎可以无限传代;转接20代后,各浓度的庆大霉素传代大肠杆菌O1对庆大霉素MIC从4μg/mL大幅度提高到25μg/mL.说明即使敏感药物,连续长期使用,也不可避免产生抗药性,导致大量繁殖.
　　药敏试验方法随着培养时间延长,抑菌效果略减弱,但不显著,20h以后平板MIC基本稳定.试管法与平板法的MIC差别较大.管碟法结合了试管法均匀、准确和平板法显示稳定的优点,适合MIC的测定.

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