金鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ）也称金鲫鱼，是由鲫鱼演化而来的水族观赏鱼中的重要品种之一。金鱼品种繁多，色彩丰富、观赏价值高，容易饲养，因而深受广大观赏鱼爱好者的喜爱。与常规养殖鱼类一样，金鱼在大面积苗种培育、水族箱养殖过程中，会有各种传染性或侵袭性疾病的发生，患病金鱼体色和形态也会发生改变，降低其观赏价值，同时给养殖者带来一定的经济损失。目前使用水产药物是防治金鱼疾病最常用的方法，但水产药物的使用不可避免地会对金鱼产生毒性作用，急性毒性试验是药物安全性评价的基础试验，它以受试动物的死亡率为试验指标，以求得药物对受试动物的半数致死质量浓度（ＬＣ５０）和安全质量浓度（ＳＣ）为常规目的。不同品种不同规格的鱼类对水产药物的敏感性不同，很多研究者对水产常用药物对鱼类的毒性试验进行过报道［１－３］，而目前有关金鱼的急性毒性研究仅有涉及到大规格鱼种的少量报道［４－５］。苗种培育是金鱼繁育中的关键环节，金鱼苗种体质弱，对外界环境抵抗力差，往往由于水质不佳或者敌害生物的存在而导致其大批量死亡。强氯精、二氧化氯是水产养殖中常用的消毒剂，可以杀灭水体中的各种病原微生物，戊二醛和亚甲基蓝是防治水霉病和杀灭一些小型寄生虫的常用药物，高锰酸钾常用于防治细菌性疾病和杀灭一些寄生虫，氯氰菊酯是一种高效的杀虫剂［６］。本试验以体长１.４～１.６ｃｍ的金鱼稚鱼为研究对象，选择以上６种常用水产药物进行急性毒性试验，旨在为金鱼及相关观赏鱼苗种培育阶段的疾病防治和安全用药提供参考。
１材料和方法
１.１供试鱼
供试金鱼取自新乡市郊区某金鱼养殖场，为同批次繁殖、同池饲养的稚鱼，体长１.４～１.６ｃｍ，试验前将金鱼苗暂养在水族箱中，适应性驯养１周。挑选规格一致，反应灵敏，无病无伤的鱼苗进行试验。
１.２供试药物
二氧化氯（有效质量分数８％，粉剂，北京华龙星宇科技发展有限公司）、水产用戊二醛（有效质量分数２０％，液体，黄石农人药业有限公司）、氯氰菊酯（有效质量分数４.５％，乳剂，湖北潜江市渔药厂）、高锰酸钾（分析纯，北京化学试剂三厂）、亚甲基蓝（化学纯，山东滕州银丰化工有限公司）、强氯精（有效氯含量５０％，粉剂，江苏武进养康生物科技有限公司）。试验前预先用蒸馏水将试验药物配制成一定质量浓度的母液，再根据需要稀释成合适的质量浓度。
１.３试验条件
所有试验均在实验室内进行，使用常温静水试验法［７］，试验用水为经过曝气２４ｈ以上的自来水，ｐＨ值为７.１±０.１，试验期间水温为（２４±２）℃，试验容器为３０ｃｍ×４０ｃｍ×２０ｃｍ的塑料水族箱，为防止试验期间材料鱼跳出，箱上加盖网布，试验期间不投饵。
１.４试验方法
首先根据鱼病防治的药物常用剂量，适当扩大或减小药物质量浓度进行预备试验，观察鱼苗反应及存活情况，根据预备试验的结果，在使金鱼苗全部存活（死亡率为０）的最高质量浓度和全部致死（死亡率为１００％）的最低质量浓度之间，按等对数间距设计５个质量浓度，同时设１个空白对照组，每个质量浓度组设３个平行。各种药物设置的质量浓度梯度详见表１。分别将试验药物的母液按比例稀释成所需质量浓度，将供试鱼按照从低到高的质量浓度逐个放入，每组对应的容器内各随机放入鱼苗２０尾。试验开始后，先做８ｈ连续观察，观察其反应和中毒症状，然后分别记录２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ时在不同质量浓度药物胁迫下供试鱼的死亡数量。判断死亡的标准是用镊子夹供试鱼的尾部，如无反应，即认为鱼已经死亡，及时捞出死鱼。为保证试验药物的有效质量浓度，每隔２４ｈ更换１次药液。试验结束后，根据试验数据，计算出不同时间药物对金鱼苗的半致死质量浓度和安全质量浓度。
１.５半致死浓度和安全浓度的计算
根据不同时间段供试鱼的死亡率，用直线内插法［７］求出２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０。ＳＣ按照以下公式计算：ＳＣ＝ＬＣ５０（４８ｈ）×０.３／（ＬＣ５０（２４ｈ）／ＬＣ５０（４８ｈ））２。
２结果与分析
６种水产药物对金鱼苗的急性毒性试验结果详见表１。不同药物作用后金鱼苗表现出不同的急性毒性效应。
２.１强氯精对金鱼苗的急性毒性作用
强氯精高质量浓度组供试鱼的急性中毒症状主要表现为焦躁不安，在水底侧游，或在水中垂直游动，药液质量浓度越大，鱼游动越剧烈，身体逐渐失衡，反应迟钝，最后呆滞于水底死亡。死亡鱼的体表和鳃部黏液较多，鳃丝淤血且边缘发白。４.０ｍｇ／Ｌ时，供试鱼２４ｈ死亡率１００％；２.８ｍｇ／Ｌ时，供试鱼２４ｈ死亡率为９０％，４８ｈ死亡率达１００％；低质量浓度组的供试鱼没有表现出明显的中毒反应，２.０ｍｇ／Ｌ时，供试鱼２４ｈ死亡率为３０％，９６ｈ死亡率为５０％；１.４ｍｇ／Ｌ时供试鱼在２４ｈ时死亡率为１０％，９６ｈ死亡率达到３０％；在１.０ｍｇ／Ｌ强氯精作用下，７２ｈ后供试鱼开始出现死亡情况，９６ｈ死亡率为１０％；强氯精对金鱼稚鱼的２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０分别为２.３ｍｇ／Ｌ，２.１ｍｇ／Ｌ和２.０ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.５３ｍｇ／Ｌ。
２.２二氧化氯对金鱼苗的急性毒性作用
二氧化氯处理组在３.２ｍｇ／Ｌ和３.８ｍｇ／Ｌ时，金鱼苗没有异常反应，４０ｈ后出现死亡，４８ｈ死亡率为１０％，９６ｈ死亡率分别为２０％和３０％；４.５ｍｇ／Ｌ时，供试鱼２４ｈ死亡率１０％，９６ｈ死亡率达到４０％；高质量浓度二氧化氯处理下供试鱼快速游动，身体失衡，死亡前游动缓慢，呼吸困难，死后鳃盖和口张开。５.４ｍｇ／Ｌ时，供试鱼２４ｈ死亡率达３０％，９６ｈ达到１００％；而在６.４ｍｇ／Ｌ的高质量浓度处理下，供试鱼２４ｈ死亡率达到８０％，４８ｈ达到１００％。二氧化氯对金鱼稚鱼的２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０分别是５.８ｍｇ／Ｌ，５.４ｍｇ／Ｌ和４.７ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为１.４ｍｇ／Ｌ。
２.３戊二醛对金鱼苗的急性毒性作用
戊二醛作用于金鱼稚鱼后，在２.３ｍｇ／Ｌ和２.７ｍｇ／Ｌ的低质量浓度处理组，２０ｈ后鱼苗开始出现死亡情况，２４ｈ死亡率为１０％，至９６ｈ时死亡率分别达到２０％和３０％；中高质量浓度的戊二醛处理下，急性中毒现象表现为往水面窜动，浮头，体色变暗，高质量浓度组的供试鱼眼睛发白，整个眼眶突出。戊二醛质量浓度为３.２ｍｇ／Ｌ时，鱼苗１５ｈ开始出现死亡情况，２４ｈ死亡率为２０％，９６ｈ死亡率达到６０％，质量浓度为３.７ｍｇ／Ｌ时，６ｈ开始出现死亡情况，２４ｈ死亡率为７０％，４８ｈ死亡率达１００％；在４.３ｍｇ／Ｌ的高质量浓度作用下，金鱼苗４ｈ开始死亡，２４ｈ内１００％死亡；戊二醛对金鱼稚鱼的２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０分别为３.５ｍｇ／Ｌ，３.３ｍｇ／Ｌ和３.０ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.８８ｍｇ／Ｌ。
２.４高锰酸钾对金鱼苗的急性毒性作用
高锰酸钾质量浓度为１ｍｇ／Ｌ时，３６ｈ后金鱼苗开始出现死亡，４８ｈ死亡率为１０％，９６ｈ死亡率为２０％，死亡金鱼体色发黄，鳍条上附有红棕色污物；１.４ｍｇ／Ｌ时，１５ｈ开始出现死亡，２４ｈ死亡率为１０％，９６ｈ死亡率达８０％；质量浓度在２.０ｍｇ／Ｌ时，２４ｈ的死亡率为４０％，４８ｈ死亡率为８０％，９６ｈ死亡率为１００％；在高质量浓度高锰酸钾作用下，金鱼苗即刻表现出明显的中毒症状：反映迟缓，鳃变为黄色，呼吸频率加快，体色变黑。质量浓度为２.８ｍｇ／Ｌ时，金鱼苗８ｈ后开始死亡，２４ｈ死亡率为６０％，４８ｈ死亡率为１００％；在４ｍｇ／Ｌ的高锰酸钾溶液中，金鱼苗３ｈ出现死亡，２４ｈ死亡率为１００％。高锰酸钾对金鱼稚鱼的２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０分别为２.４ｍｇ／Ｌ，１.７ｍｇ／Ｌ和１.２ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.２６ｍｇ／Ｌ。
２.５亚甲基蓝对金鱼苗的急性毒性作用
在高浓度亚甲基蓝作用下，金鱼苗身体失衡，游动缓慢，呼吸困难，逐渐沉至水底，金鱼死亡后体色变深，各鳍条和鳃的颜色变为蓝色。药物质量浓度为１５ｍｇ／Ｌ时，２０ｈ后开始出现死亡，２４ｈ死亡率达到２０％，９６ｈ死亡率为５０％；质量浓度为１７.８ｍｇ／Ｌ时，２４ｈ死亡率为３０％，９６ｈ死亡率为９０％；质量浓度为２１.２ｍｇ／Ｌ和２５.２ｍｇ／Ｌ时，２４ｈ死亡率均为４０％，分别在９６ｈ和４８ｈ死亡率达到１００％；而在３０ｍｇ／Ｌ的亚甲基蓝处理下，供试鱼１０ｈ开始出现死亡，２４ｈ死亡率为７０％；４８ｈ死亡率为１００％。亚甲基蓝对金鱼稚鱼的２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０分别为２６.８ｍｇ／Ｌ，１７.８ｍｇ／Ｌ和１５.０ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为２.３６ｍｇ／Ｌ。２.６氯氰菊酯对金鱼苗的急性毒性作用金鱼苗在０.０２４ｍｇ／Ｌ氯氰菊酯处理下即刻出现中毒症状，鱼体失去平衡，窜游、旋游，之后呼吸逐渐减弱至死亡，沉至水底，鱼体中毒后体色变淡，身体向一侧弯曲，眼球突出、眼底有出血点，鳍条颜色无变化，供试鱼在２ｈ后开始死亡，２４ｈ死亡率为１００％。在０.００９８ｍｇ／Ｌ和０.０１５４ｍｇ／Ｌ的氯氰菊酯处理下，金鱼苗出现的中毒症状稍弱于０.０２４ｍｇ／Ｌ组，８～１０ｈ后出现死亡，２４ｈ死亡率为５０％～７０％，９６ｈ死亡率为１００％；０.００４ｍｇ／Ｌ组的金鱼苗２４ｈ后出现死亡，４８ｈ死亡率为３０％，９６ｈ死亡率为４０％；而在０.００６２ｍｇ／Ｌ氯氰菊酯处理下，金鱼苗１８ｈ后开始出现死亡，２４ｈ死亡率为１０％，９６ｈ死亡率达到５０％，氯氰菊酯对金鱼稚鱼的２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ的ＬＣ５０分别为０.００９８ｍｇ／Ｌ，０.００９４ｍｇ／Ｌ和０.００６２ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.００２ｍｇ／Ｌ。
３讨论
强氯精又称三氯异氰尿酸（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｉｓｏｃｙａｎｕｒｉｃａｃｉｄ，ＴＣＣＡ），在水产养殖中作为一种高效的消毒杀菌剂而普遍用于水体消毒，杀菌力为漂白粉的１００倍左右［６］。ＴＣＣＡ对无鳞鱼类和有鳞鱼类的苗种有较强的急性毒性，将云斑鮰置于４ｍｇ／Ｌ的强氯精溶液中，８ｈ死亡率达１００％，ＳＣ为０.３８ｍｇ／Ｌ［１］，对剑尾鱼的ＳＣ为０.２２ｍｇ／Ｌ［２］，对南方大口鲶的ＳＣ是０.１４７ｍｇ／Ｌ［６］。本试验结果表明，强氯精对金鱼稚鱼２４ｈ的ＬＣ５０为２.３ｍｇ／Ｌ，９６ｈ的ＬＣ５０为２.０ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.５３ｍｇ／Ｌ。而生产上养殖水体中强氯精使用一般是０.１～０.５ｍｇ／Ｌ全池泼洒，用于防治细菌性疾病［６］。因此，从安全角度考虑，在金鱼苗种培育阶段应当慎用或禁用强氯精。
二氧化氯是一种高效低毒的广谱杀菌消毒剂，可杀死细菌芽胞、病毒、原虫和藻类等［６］，其消毒作用不受水质、ｐＨ值、氨氮以及有机物浓度的影响，是一种绿色消毒剂。二氧化氯对鲇的ＳＣ为１５.１ｍｇ／Ｌ［９］。对鳜鱼苗的ＳＣ为０.３７ｍｇ／Ｌ［１０］，本试验中，二氧化氯对金鱼苗的ＳＣ为１.４ｍｇ／Ｌ。生产上二氧化氯的全池泼洒使用质量浓度为０.１～０.２ｍｇ／Ｌ［６］，因此在金鱼苗种培育中可以使用二氧化氯作为疾病防治的全池泼洒药物。但二氧化氯的杀菌能力随温度的降低而减弱。在使用过程中应引起注意。戊二醛为无色油状液体，其碱性水溶液具有较好的杀菌作用，可杀灭细菌、真菌、病毒，当ｐＨ值为７.５～８.５时，杀菌作用最强，其作用效果较甲醛强２～１０倍，生产上用于水产养殖环境及养殖工具的消毒［６］。试验结果表明，戊二醛对金鱼苗的２４ｈＬＣ５０为３.５ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.８８ｍｇ／Ｌ。高于水产用戊二醛的推荐使用剂量０.０４ｍｇ／Ｌ，因此戊二醛可以在金鱼苗种培育过程的疾病防治中使用。高锰酸钾是一种强氧化剂，其水溶液与有机物接触，能释放出新生态氧，迅速氧化有机物，从而起到杀菌、杀虫的作用，常用于防治鱼虾等细菌、真菌和寄生虫类疾病及设施、工具的消毒［６］。生产上高锰酸钾对一般养殖鱼类常用剂量为遍洒１～２ｍｇ／Ｌ和１０～２０ｍｇ／Ｌ浸浴２０～３０ｍｉｎ。高锰酸钾在水中容易产生二氧化锰沉淀，对鱼的鳃组织有较强的损坏作用，高锰酸钾在质量浓度很高的情况下还能氧化鱼体本身，因此鱼类对高锰酸钾非常敏感。据报道，高锰酸钾对泥鳅的ＳＣ为０.７５ｍｇ／Ｌ［１１］，对白斑狗鱼幼鱼的ＳＣ为１.３７ｍｇ／Ｌ［１２］，对南方大口鲶的ＳＣ为０.５９ｍｇ／Ｌ［８］。对鲇鱼苗的ＳＣ是０.８２ｍｇ／Ｌ［９］，本试验中，高锰酸钾对金鱼苗的２４ｈＬＣ５０为２.４ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.２６ｍｇ／Ｌ，远低于生产中常规使用剂量，因此，建议除了对养殖设施和工具的消毒外，在金鱼苗种培育过程中禁用高锰酸钾。
亚甲基兰是一种氧化剂，通过氧化和还原反应起到杀菌和杀虫的作用。在水产养殖中用于防治水霉病、烂尾病、红嘴病，杀灭小瓜虫和三代虫，以及亚硝酸盐或氰化物中毒的解毒等［６］。生产上常以０.５～１.０ｍｇ／Ｌ水体全池遍洒或１０ｍｇ／Ｌ水体浸浴１０～２０ｍｉｎ防治鱼类水霉病。亚甲基蓝有助于增加鱼类的呼吸机能，药性温和，对鱼毒性较低，试验中对金鱼苗的２４ｈＬＣ５０为２６.８ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为２.３６ｍｇ／Ｌ，高于生产上常规全池泼洒的使用剂量，因此，可以作为金鱼和其他观赏鱼的疾病防治药物使用。
氯氰菊酯为拟除虫菊酯类杀虫剂，具有触杀和胃毒作用。杀虫广谱，药效迅速，水产养殖中用于杀灭水体中鱼类的敌害剑水蚤和水生昆虫的幼虫如水蜈蚣等，还用于预防和治疗鱼类的中华蚤、锚头蚤、鱼鲺等寄生虫疾病［６］。不同鱼类对氯氰菊酯的敏感性不同，不同发育阶段的鱼对毒物的敏感性也存在着一定的差异，但氯氰菊酯对不同的鱼类均表现出较强的毒性作用，其毒性机制是影响神经膜上的Ｎａ＋通道，阻断神经传导，影响扰乱机体离子代谢，中毒达到一定程度后，金鱼出现抽搐，运动失调直至死亡。氯氰菊酯对白斑狗鱼幼鱼的ＳＣ是０.００８ｍｇ／Ｌ［１２］，对蓝点笛鲷鱼苗的ＳＣ是０.００２８ｍｇ／Ｌ［３］，本试验中，氯氰菊酯对金鱼苗的２４ｈＬＣ５０为０.００９８ｍｇ／Ｌ，ＳＣ为０.００２６ｍｇ／Ｌ。鉴于其毒性较强，极低剂量就能致鱼类死亡，因此，在使用过程中一定要注意操作方法，控制使用剂量，建议在苗种放养之前使用氯氰菊酯杀虫除害，而在观赏鱼苗种培育中应慎用或禁用氯氰菊酯进行全池泼洒。
同一药物对不同的鱼类表现出不同的毒性作用，ＳＣ值有一定的差异，可能与受体生物对药物的耐受性不同有关，还与供试鱼类的年龄、体长大小以及试验环境条件等有关。一般无鳞鱼类较有鳞鱼类对药物更敏感，与药物对体表直接渗透吸收有关，而对于不同发育阶段的鱼而言，鱼苗阶段的个体新陈代谢快，其吸收毒物的速率也快，因此，在鱼苗培养阶段对药物的选择使用上要慎重。目前水产养殖中滥用药物的现象非常严重，导致病原生物产生抗药性以及水体微生态环境的破坏，诱发更严重的病害发生。谨慎用药应成为一条重要原则，应选择毒性小、对水体污染小的药物，同时兼顾价格便宜和使用方便等特点。就该试验所涉及的６种水产药物而言，二氧化氯、戊二醛和亚甲基蓝等具有较强的杀菌作用，对金鱼稚鱼的安全性相对较高，是金鱼苗种培育过程中优先选择的药物。
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