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骨钙素(osteoealein)是Hausehka于1975年在各种组织中寻找依赖维生素K的蛋白质时,在骨中发现的。就目前所知它在体内只由成骨细胞合成,普遍存在于脊椎动物的骨骼和牙质中,其分子结构以含3个梭化的谷氨酸为特点也叫y一梭基谷氨酸蛋白(BGP)。本实验中,SephaerylS一200分离后得到4个蛋白峰,BGP位于第4个峰,较其分离效果更好。这可能是洗脱速度不同造成,本实验洗脱速度较Taylor慢。BGP是一种比较稳定的蛋白质,可放慢洗脱速度以提高分辨率,作者认为以每小时5一10ml的速度较理想。FPLC的第1个杂蛋白峰很高,即SePhacrylS一200分离后的含BGP的峰还很不纯。MonoQ商品柱是一种非常有效的分离蛋白质和多肤的离子交换柱,本实验中得到了理想的BGP单峰。Toylor等每59干重骨提取150拜g,本实验结果为每59干重骨提取160拜g。
用Sephacryl纯化后的BGP作为免疫抗原,于免疫第3个月产生了高效价的抗体。38.5%结合率的最终抗体稀释度为1,35000,国内外文献尚未见有高于此稀释度的报告。BGP属于非胶原蛋白,其分子稳定不易降解,加之高质量的抗体,因此本放免方法十分稳定,重复性好,经测定与甲状旁腺激素、降钙素和胰岛素无任何交叉反应。
骨质疏松时骨转换加快,骨重建的位点增多,骨形成和骨吸收均增加,反映骨形成的指标BGP增高闭。本研究测定了42例未经治疗的骨质疏松患者,血清BGP为(6.2士1.9)ng/ml,明显高于正常人。21例甲状旁腺功能亢进患者血清BGP明显高于正常人,且高于其它各组骨代谢疾病患者,而甲状旁腺功能减退者血清BGP则降低。PTH具有明显的刺激破骨细胞的活性,PTH过多时破骨细胞活性增加,继之成骨细胞活性也相偶联地代偿性增加,因此血清BGP水平增高。另外甲状旁腺功能亢进,由于PTH升高,使1.25(OH)D增加,进而促进BGP合成,也是导致甲旁亢时BGP明显增加的原因。随着手术切除甲状旁腺腺瘤,血PTH降低,术后半年见血清BGP由(18.4+7.7)ng/ml降至(7.3+3.2)ng/ml,但仍高于正常人,这可能与术后骨修复,骨形成较正常人还活跃有关。甲状旁腺功能减退时骨转换减慢,骨形成减少,血清BGP降低。
畸形性骨炎时,骨转换加快,骨形成和骨吸收均增加血BGP值增高,但其增高幅度远不如血碱性磷酸酶。Delmas曾提出,本病的血清BGP不像AKP增高明显,可能是因为畸形性骨炎时骨结构改变,BGP不易进入血液造成。其详细机理尚不明了。糖皮质激素增多,成骨细胞的数量减少,因此血清BGP值下降。本实验观察到库欣综合征患者血清BGP水平明显低于正常人,且低于其它各组骨代谢疾病患者,表明该病骨形成受到很大程度抑制。