所用荧光单克隆抗体为:异硫氢酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人P53单克隆抗体:用于免疫阴性对照IgGI一FITC为美国Pharmingne产品，由北京岳泰生物公司提供。流式细胞仪检测(CScan，美国DB公司生产):上机前以标准荧光微球调整仪器的变异系数并稳定在%2以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在MaC5ntosh650计算机上用软件(DB公司提供)分析数据，由HP12O0/cCP打印结果。以P53分子表达标记细山东中医药大学2005届博士学位论文胞荧光强度表示表达水平。检测与对照组比:▲P<0.05▲▲P<0.01与DDP组比结果显示:人GP细胞经正常鼠血清各组与正常牛血清组孵育2h4、4h8，其突变型P53基因的荧光表达强度处于较高水平，经统计学处理，正常鼠血清各组与小牛血清组无明显差异(P>0.05)，经消瘤方各含药血清作用24h，P53基因的荧光表达强度有明显下降，继续培养至4h8，表达抑制作用增强，以巧%药血清作用荧光强度下降最明显，与相应浓度正常血清比，有明显差异(P<0.01);D即对细胞P53基因的表达亦有明显抑制作用，与正常血清组比有显著性差异药血清十QDP组对GP细胞P53基因的荧光表达抑制作用明显增强，随作用时间延长抑制作用增强，与D即组比，有显著性差异(P<0.01)。图35显示:正常鼠血清各组与正常牛血清组P53基因的荧光强度波峰显著右移，荧光强度高，经各实验组作用，P53波峰显著左移，10%鼠药血清十DDP组荧光强度波峰左移最明显，荧光强度值显著下降。
　　细胞悬液的制备:取对数期生长的人肺癌GP细胞，经0.25%胰酶消化，计数，细胞加入含1溅小牛血清的即Ml1640完全培养液，接种于50ml培养瓶中，每瓶细胞数5xl护/ml，置37℃、%5C仇饱和湿度的C02培养箱中培养，培养24小时，至细胞生长旺盛贴壁后，去掉原培养液，分别加入以下各组不同浓度的含药血清或含皿P的细胞培养液于培养箱中继续培养2h4、4h8，(每组设3个复瓶)，经0.25%胰酶消化后收集细胞，1000/rmin离心5min，0.01molL/PBS缓冲液洗2次，充分吹打成单细胞悬液，4℃、7俄冷甲醉固定1h2以上待测。上机检测前，将GP细胞悬液以1000r/min离心3min，去掉7既甲醇固定剂，PBS液洗涤2次，调整细胞浓度了/ml待用。所用荧光单克隆抗体为:异硫氢酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人n昭3多克隆抗体:用于免疫阴性对照1gGI一FITC为美国一Pharmingne产品，由北京岳泰生物公司提供。荧光单抗免痊标记培养细胞:四支试管各加待侧细脚暴滚500微升(细胞数为1000000个/ml)，其中的三支加nm23单抗工作液20微升，另一支加阴性对照单抗IgGI一FITC，避光反应20min，待测。
　　流式细胞仪检测(FACScan型，美国DB公司生产);上机前以标准荧光微球调整仪器的变异系数并稳定在跳以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在MaC1ntosh650计算机上用软件(DB公司提供)分析数据，由HP12O0c/CP打印结果。以mn23分子表达标记细胞荧光强度表示表达水平。肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，2001年WHO资料显示全球肺癌死亡人数超过人，且仍在继续增加。其中非小细胞肺癌约占肺癌总数的80%左右，以上确诊时己属m、VI期。治愈率低，5年生存率仅14%以下。手术是早期非小细胞肺癌的首选，而m、VI期病人除部分m期患者经诱导治疗后可手术切除，大部分需以内科治疗。主要包括化学治疗(简称化疗)、中医中药及生物治疗等综合治疗措施，在此期治疗中，大多病人已无治愈之可能，面临的首要问题是如何提高化疗的有效率、延长生存期、改善生活质量。由于中医药具有多层次、多环节、多靶点的作用特点以及扶正中药对免疫功能的双向调节优势，使得中医药在此阶段的治疗尤为重要。
　　局部复发和远处转移是手术治疗失败的主要原因:手术是早期非小细胞肺癌的首选治疗，生存率与临床分期呈正相关，但长期的生存指标不满意。MuontainCF等报道一组I、11、111期根治术后局部和远处转移分别为30%和和79%;10%和90%。LilnebaumRC亦指出远处转移是手术治疗失败的主要原因。另。表明晚期病例疗效较差。非小细胞肺癌化疗的临床进展:化疗是m、W期非小细胞肺癌应用最多和最主要的治疗手段，虽然疗效尚不令人满意，但随着化疗方案的不断改进和新的化疗药的不断出现，其疗效和安全性己有所提高。现就近年化疗的治疗现状综述如下:NSCLC的化疗迄今仍以含铂方案为主，患者MST可增加1.5一2.0个月;1年生存率可提高一78%的症状得到改善。第三代化疗新药包括泰素、泰索帝、诺维本、健择和开普拓。近年来，国际多中心随机对照研究已证明:第三代治疗非小细胞肺癌的细胞毒药物与铂联合，其疗效优于第二代药物与铂联合，且毒副作用较低。
　　非小细胞肺癌放射治疗的进展:三维适形放疗的开展，在大大提高肿瘤放射剂量的同时可以减少放射对肿瘤周围正常组织的损伤，从而提高了疗效。局部晚期非小细胞肺癌的同步化疗/放疗，延长了病人的生存期，改善了病人的生活质量，其优点有二，一是兼顾到局部治疗与全身治疗;二是泰素、泰索帝及健择等新药既具有较好的抗癌活性，又对放射治疗具有增敏作用。非小细胞肺癌的生物治疗:分子靶向药物治疗非小细胞肺癌是近年发展最快、最具潜力的在国际上广泛受到重视的亮点。最引人注目的是rlesas，它是一种表皮生长因子受体一酪氨酸激酶抑制剂(EGFR一TKI)，近年来用于治疗晚期非小细胞肺癌，在国际上已进行了DIEALI/IDAELZ以及NITACT/INITAC咒大规模多中心随机对照研究‘刘其研究结果初步认为:①Iersas主要用于化疗失败或化疗后复发、体质和功能状态差的晚期非小细胞肺癌患者;②rIesas的推荐剂量是每日口服25Omg;③应用后缓解肺部症状的中位时间为8一10天:④单药rIessa治疗非小细胞肺癌的有效率为1%8(但PR+SD达到50%左右):⑤rIessa的主要毒副反应是座疮样皮疹及腹泻，一般不严重，偶尔有发生间质性肺炎，应予注意。

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