根据专家观察，这样的理论和现象都是值得各位作者朋友深思学习的，所以希望大家多做研究学习，争取总结出更多更好的经验!

                          作者：管淑玉，林家勤，曾宇，刘广锋

【择

【摘要】  目标 研究5种中草药对致病弧菌的抑菌活性，为水产物的安详用药提供参考。要领 回收纸片法和试管法，以溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、鲨鱼弧菌 (Vibrio carchariae)为供试菌株，测定中草药差异极性萃取部门的抑菌圈和最小抑菌浓度。 功效 夹竹桃叶、芒果叶、苦楝叶和羊蹄甲叶4种中草药乙酸乙酯萃取部门对供试弧菌有很好的抑菌浸染；苦楝叶和羊蹄甲叶石油醚萃取部门对副溶血弧菌有抑菌浸染；芒果叶的水溶性部门对塔氏弧菌有很强的抑菌浸染；枇杷叶提取物对4株弧菌均无克制浸染。结论 除枇杷叶外，其他4种中草药可差异水平的克制致病弧菌的发展，其克制致病弧菌的活性因素有待于进一步研究。

【关键词】  中草药；弧菌；抑菌活性；最小抑菌浓度

　　Abstract:Objective To study the anti?bacteria activities of five herbs, to provide references for the safe drugs of aquaculture. Methods  Using Vibrio coralliilyticus, Vibrio tubiashii, Vibrio parahaemolyticus and Vibrio carchariae as the tested bacteria, the inhibition zone and the minimal inhibitory concentration（MIC）were measured. Results  The extracts, extracted with ethyl acetate from the leaves of Nerium indicum Mill., Mangifera indica Linn., Melia azedarach L. and Bauhinia purpurea could inhibit vibrio. And the extracts, extrated with petroleum ether from leaves of Melia azedarach L. and Bauhinia purpurea can inhibit Vibrio parahaemolyticus, too. The remainder extracts of Mangifera indica Linn.showed strong inhibition effect on Vibrio tubiashii. While the extracts of Eriobotrya japonica showed no inhibition effect. Conclusion  Four of the five herbs show anti?bacteria activities and the study on active compounds should be done in future. 

　　Key words:herb；Vibrio；anti?bacteria activity；minimal inhibitory concentration
  
　　跟着当代集约化和局限化水产养殖的成长，养殖中水产动物传染细菌的几率大大增进。为了提防水产动物疾病，大量抗生素类药物被用作水产药物。滥用抗生素使致病菌的耐药性增进，药物的有用性低落，同时也加剧了情形污染，残留药物低落了水产制品的品格，激发了市场对水产物安详性的质疑，低落了水产商品在国际商业中的竞争力。因此，开拓更换抗生素的高机能、无毒副浸染、安详高效的抑菌药物引起了宽大科研职员的存眷。

    本研究以夹竹桃（Nerium indicum Mill）、芒果（Mangifera indica Linn.）、苦楝（Melia azedarach L.）、羊蹄甲（Bauhinia purpurea）和枇杷（Eriobotrya japonica）等5种中草药为研究工具，选取对水产物危害较大的4株致病弧菌为尝试菌株，旨在通过抑菌活性的筛选研究，得到安详有用的自然抑菌药物。

　　1  原料与要领

　　1. 1  仪器及试剂
   
　　首要仪器有DFT?200型摇晃式高速中药毁坏机（温岭市大德中药机器有限公司）、RE52CS型旋转蒸发器（上海亚星生化仪器厂）、LDZX40CI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗东西厂）、150A生化作育箱（金坛市迅生仪器厂）、SW?CJ?1D型清洁事变台（苏州苏清洁化装备有限公司）。所用试剂均为说明纯。行使的作育基为2216E作育基。环丙沙星纸片为杭州天和微生物试剂有限公司产物。

    供试菌种：溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、鲨鱼弧菌 (Vibrio carchariae)由南海水产研究所提供。

　　1. 2  供试药材及预处理赏罚

    供试药材为广东常见的5栽培物的叶，供试的5栽培物别离是夹竹桃（Nerium indicum Mill）、芒果（Mangifera indica Linn.）、苦楝（Melia azedarach L.）、羊蹄甲（Bauhinia purpurea）、枇杷（Eriobotrya japonica）。5种供试植物均采自广东药学院药用植物园，原植物均经药用植物教研室寒岑寂副传授判断。供试植物叶片阴干后毁坏成粗粉备用。取供试药材粗粉各20 g，用60%（φ）乙醇回流提取90 min后滤过，滤液减压浓缩至50 mL后，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯萃取。将3种萃取液别离减压浓缩至1 g/mL（以生药计），即得石油醚萃取部门（Ⅰ）、乙酸乙酯萃取部门（Ⅱ）和水溶部门（Ⅲ）。

　　1. 3  病原菌的疏散和菌悬液制备［1］

    将4株供试菌别离划线接种于平皿作育基中，于28 ℃作育24 h后，挑选单个菌落转接于斜面作育基中，28 ℃作育24 h后，用2 mL 0.9% NaCl溶液举办洗脱即制得所需菌悬液。

　　1.4  纸片法抑菌试验

    按无菌操纵规程［2］，汲取4株供试菌悬液各0.1 mL，别离加到平板作育基上并涂布匀称。将预先灭菌烘干并浸蘸定量药液的滤纸片（直径为5 mm）平贴在含菌作育基上。同时用浸有响应溶剂的滤纸片做比较。每份样品做3份，功效取均匀值。28 ℃倒置作育，并于12 h和24 h调查抑菌结果，测定抑菌圈的直径。以环丙沙星为阳性比较。

　　1.5  试管稀释法测最低抑菌浓度

    回收试管稀释法，以响应溶剂作比较，测定有抑菌活性的药液的最低抑菌浓度(MIC)。每种提取物为一组，每组取无菌试管12支，于第1管中插手1.0 mL浓度为2×105 CFU(colony forming units)/mL的菌液，在2～10管中每管插手1.0 mL 浓度为1×105 CFU/mL菌液，在第1管内插手中药浓缩液1.0 mL，充实混匀后取1.0 mL放入第2管，混匀后再取1.0 mL放入第3管，第1管内的药物浓度为原液的1/2，第2管为第1管的1/2，别的类推，直至第10管，每种药物的第11管作菌液比较（仅加菌液不加中药），第12管作药物比较（仅加中药不加菌液），以能克制细菌发展（作育后作育基仍清澈）的最小药物浓度为其MIC。