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                   作者：陈云，陈涛，卢婷利，胡惠静，马玉樊

【择

【摘要】  目标 成立测定炔雌醇脂质体的含量及包封率的要领。要领 回收HPLC法,以Agilent HC?C18柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm)为色谱柱，活动相为甲醇?水(体积比70∶30)，柱温为室温，流速为1.0 mL·min-1，紫外检测波长为281 nm。功效 炔雌醇与卵磷脂、溶剂峰能有用疏散，炔雌醇在2 ～20 μg·mL-1范畴内线性相关精采（r=0.999 7, n=10），接纳率在98.0%～102.0%之间。结论 所成立的要领轻盈、精确、迅速度高、要领靠得住，可作为炔雌醇脂质体的含量及包封率的质量节制要领。

【关键词】  反相高效液相色谱法；炔雌醇脂质体；含量测定；包封率

　　Abstract:Objective  To establish an HPLC method for the analysis of ethinylestradiol content and entrapment efficiency of ethinylestradiol liposomes.Method Samples were analyzed on an Agilent HC?C18 column（4.6 mm× 250 mm，5 μm）using methanol?water（70∶30）as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1 and detection wavelength 281 nm.Results Ethinylestradiol had a good linearity over the range of 2～20 μg·mL-1 (r=0.999 7, n=10), the average recovery was between 98.0% and 102.0%. Conclusion This method is simple, accurate and sensitive for the quality control of the liposomes.

　　Key words:HPLC; ethinylestradiol liposomes; ethinylestradiol; entrapment efficiency
　　
　　炔雌醇又名乙炔雌二醇，为3?羟基?19?去甲?17α?孕甾?1，3，5（10）?三烯?20?炔?17?醇。化学布局式为［1］：
  
　　炔雌醇作为雌激素类药，其对下丘脑和垂体有正、负反馈浸染，小剂量时可刺激促性腺素渗透，其活性是雌二醇的7～8倍，己烯雌酚的20倍，临床多用于月经杂乱，如闭经、月颠末少、成果性质宫出血、绝经期综合征、子宫发育不全、火线腺癌等疾病的治疗，具有疗效确切、价值适中等利益，易被宽大妇女所接管。但其亦有很多副回响，如恶心、吐逆、阴道出血、诱发子宫内膜癌等［2,3］，因而严峻地影响到病人的用药安详。将其制备成脂质体，可以有用地镌汰给药次数和给药量，进步生物操作度，低落毒副浸染。
    　　
　　本文制备了炔雌醇脂质体，并回收反相高效液相色谱法测定炔雌醇脂质体的含量和包封率［4,5］。尝试功效表白，该要领精确靠得住，可作为炔雌醇脂质体质量节制的一个有用本领。

　　1  仪器与试药
    　　
　　Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2996紫外检测器，Waters 717自动进样器，Waters Millennium色谱事变站；Agilent HC?C18(4.6 mm× 250 mm, 5 μm) 色谱柱；日立U?3010/3310紫外可见分光光度计(北京天美公司)；Nicomp 370激光散射粒径仪（ 加拿大Santa Burbara公司），挤压器(加拿大Lipex Biomembranes公司) 。甲醇(色谱纯，SK Chemicals)；炔雌醇质料药（上海医药团体有限公司）；精制蛋黄卵磷脂egg phosphatidylcholine (西安力邦制药有限公司，质量分数98%) 。

　　2  要领与功效

　　2.1  脂质体的制备

    回收薄膜法制备炔雌醇脂质体［6-8］：按药物含量15%～30%（摩尔比）称取炔雌醇质料药和蛋黄卵磷脂，将其溶于适量甲醇?氯仿（体积比1∶2）中，漩涡殽杂匀称后，50 ℃下氮气吹干，再用真空泵将剩余有机溶剂抽干。插手磷酸盐缓冲液漩涡殽杂，高速剪切1～2 h，用脂质体挤压器将其依次颠末400、200、100 nm聚碳酸盐滤膜挤压，即得。得到的脂质体的均匀粒径都在110 nm阁下，电镜调查，泛起匀称的圆球状。

　　2.2  色谱前提

　　色谱柱：Agilent HC?C18柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm)；活动相：甲醇?水(体积比70∶30)；柱温：室温；流速为1 mL·min-1；紫外检测波长为281 nm；进样量50 μL。

　　2.3  滋扰试验

    称取20 mg炔雌醇置10 mL容量瓶中，插手甲醇?水（体积比70∶30）消融并稀释至刻度，得炔雌醇比较品溶液。别离慎密汲取空缺脂质体及炔雌醇脂质体各0.2 mL，用甲醇?水（体积比70∶30）稀释至2.0 mL破乳，振荡混匀，别离获得空缺脂质体溶液和脂质体炔雌醇溶液。将上面制备的3种溶液过0.22 μm有机滤膜，各取50 μL进样说明，得色谱图。功效表白，卵磷脂和炔雌醇的保存时刻相距很大，卵磷脂对炔雌醇的测定无滋扰。炔雌醇比较品和炔雌醇脂质体的峰面积基内情同，证明卵磷脂没有吸附炔雌醇，也没有改变炔雌醇的性子和布局，见图1。

　　2.4  线性相关考查 

    取炔雌醇比较品溶液，按上述色谱前提，别离进样1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 μL，以峰面积（A×10-6）为纵坐标，炔雌醇质量浓度（μg·mL-1）为横坐标举办线性回归，得线性回归方程：A=0.4026 C-0.4240， r=0.999 7， 功效表白炔雌醇的质量浓度在2～20 μg·mL-1范畴内线性相关精采。

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