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             作者：管小艳，刘云军，何丽新，陆家政，梅文杰  

【择

【摘要】  目标与要领 合成一个新的钌（Ⅱ）多吡啶共同物［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2 ［4,7?dmp=4,7?二甲基?1,10?菲咯啉，PYNI=2?（2′?吡啶）萘基咪唑］，用元素说明、电喷雾质谱、核磁共振谱对该共同物举办表征；用电子接收光谱、荧光光谱、黏度测试和DNA熔点测定研究共同物与DNA的浸染。功效与结论 共同物［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2与DNA之间通过插入模式团结。

【关键词】  钌（Ⅱ）共同物；DNA；光谱性子；黏度测试
　　Abstract:Objectiveand Methods  A new Ruthenium(Ⅱ) polypyridyl complex ［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2 ［4,7?dmp=4,7?dimethyl?1,10?phenanthroline, PYNI=2?(2′?pyridyl)naphthoimidazo?imidazole)］has been synthesized and characterized by elemental analysis, ES?MS and 1H NMR. The DNA?binding behaviors were investigated by electronic absorption spectroscopy, fluorescent spectroscopy, viscosity measurement and DNA melting experiment.  Results and Conclusion The results showed the complex ［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］2+binding to DNA through intercalation mode.

　　Key words:ruthenium (Ru) complex; DNA; spectral properties; viscosity measurement

    连年来，人们对小分子过渡金属多吡啶共同物与大分子DNA彼此浸染的研究慢慢深入，这一研究已经成为生物无机化学规模异常活泼的研究课题。八面体多吡啶钌金属共同物与DNA的浸染引起了人们极大的乐趣［1,2］，与其他金属共同物对比，这类共同物易于结构一个既为刚性又带手性的八面体构型，而且共同物的热力学不变性好，光化学和光物理信息富厚，既可以作为DNA布局探针［3］，又可以作为DNA分子光开关、DNA介导的电子转移、DNA断裂试剂［4］等。研究表白这些共同物可以或许以插入、静电和沟面团结三种方法与DNA浸染，个中插入模式最为重要，由于共同物的许多性子都与插入团结有关。本文合成了一个新的钌(Ⅱ)多吡啶共同物［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2 ［4,7?dmp=4,7?二甲基?1,10?菲咯啉，PYNI=2?（2′?吡啶）萘基咪唑］，合成蹊径见图1。

　　用元素说明(EA)、电喷雾质谱(ES?MS)、核磁共振(1H NMR)对共同物举办具体的表征。回收电子接收光谱、荧光光谱、黏度测试和DNA熔点测定研究共同物［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2与DNA浸染，研究功效表白［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］2+通过插入方法与DNA团结。

　　1  尝试部门

　　1.1  试剂和仪器
    　　
　　尝试中行使试剂均为说明纯，行使前未经进一步纯化，缓冲溶液用双蒸水制备；DNA购自华丽公司，用Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液配成必然浓度的储蓄液于冰箱中生涯；共同物用5 mmol/L Tris?HCl，50 mmol/L NaCl(pH=7.0)缓冲溶液配制。
       
　　LCQ电喷雾质谱仪(ESMS, Finnigan)，快原子轰击质谱（FAB?MS)行使VG ZAB?HS质谱仪，Elemental Vario EL 元素说明仪，Bruker ARX?500型核磁共振仪，Shimadu?UVPC?3000 型紫外?可见光谱仪，荧光光谱用Rf?4500荧光光谱仪测试，黏度测试行使乌氏黏度计。

　　1.2  共同物［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2的制备

　　称取0.312 g cis?［Ru(4,7?dmp)2Cl2］·2H2O［5］(0.5 mmoL), 0.123 g PYNI［6］(0.5 mmoL) 殽杂物插手乙二醇15 mL，加热至150  ℃氩气掩护下回响8 h，得赤色清液。冷却至室温，过滤，加40 mL水稀释后，插手NaClO4的饱和溶液即发生大量赤色沉淀。抽滤，用水，乙醚洗涤数次后干燥。将干燥后的粗产物用少量乙腈消融，用中性氧化铝（200 mesh）柱疏散。在V（甲苯）∶V（乙腈）=1∶3 殽杂溶剂淋洗下网络赤色组分，然后减压，蒸去溶剂，得赤色固体,产率62%。元素说明，实测值（%）：C 54.96，H 3.64，N  10.23；计较值(%)：C 54.95，H 3.67，N  10.19。1HNMR (DMSO?D6, 500 MHz) δ：8.34 (d, 1H, J=8.8 Hz), 8.23 (d, 1H, J=8.5 Hz), 8.19 (d, 2H, J=8.6 Hz), 8.03 (d, 1H, J=8.5 Hz), 7.88 (t, 2H, J=7.8 Hz), 7.75-7.79 (m, 2H), 7.67 (d, 1H, J=8.8 Hz), 7.47 (d, 2H, J=8.0 Hz), 7.45 (d, 2H, J=8.2 Hz), 7.23 (t, 1H, J=7.6 Hz), 7.12-7.17 (m, 2H), 7.05-7.09 (m, 2H), 7.03 (d, 1H, J=8.4 Hz), 6.81 (d, 1H, J=8.5 Hz), 5.00 (s, 1H), 2.05 (s, 6H), 2.01 (s, 6H)。 ES?MS (CH3OH): m/z 762 (［M?2ClO4?H］+), 382 (［M?2ClO4］2+)。

　　1.3  尝试要领
    　　
　　在紫外可见光谱仪中，参比池中插手3　mL的缓冲液，在样品池中插手同样体积的20　μmol/L的共同物溶液，用微量加样器每次往参比池和样品池中别离插手沟通体积的DNA储液，使DNA与共同物浓度比值（CDNA/CRu）按必然的比例递增，直至饱和，接收峰不再减色。每次混和匀称约5 min后，在200～800　nm范畴监测共同物的电子接收光谱变革。共同物［Ru(4,7?dmp)2(PYNI)］(ClO4)2与DNA团结常数按照下列方程求得［7］

　　［DNA］εa-εb=［DNA］εa-εf+1Kb(εb-εf)
   
　　［DNA］代表DNA的浓度εa，εf ，εb别离是共同物与DNA团结，自由共同物和共同物与DNA团结到达饱和时的摩尔吸光系数，Kb为共同物与DNA团结常数，Kb由拟合直线与Y轴相交的截距求得。
    　　
　　荧光光谱研究中，配制钌共同物溶液 (2 μmol/L)，用微量加样器每次往样品池中插手沟通体积的DNA储液，使DNA与共同物浓度比值（CDNA/CRu）按必然的比例递增，直至饱和。每次混和匀称约5 min后，用Rf?4500荧光光谱仪在500～800 nm范畴监测共同物的荧光光谱变革。用450 nm光源引发，记录发射光波峰和发光强度。
   
　　黏度用乌氏黏度计丈量。丈量黏度时，温度恒定在(28±0.1) ℃。牢靠DNA的浓度，逐渐增进Ru共同物浓度。相对黏度按下式计较：

    η=( t-t0)/ t0

    上式中，t0为缓冲液流经毛细管所需的时刻，t为DNA溶液(含浓度不等的 Ru共同物)流经毛细管所需的时刻。以 (η/η0 )1/3比拟率r(r=［Ru］/［DNA］)作图。η0为未加钌共同物时DNA溶液的相对黏度。
   
　　DNA熔点测定尝试，用紫外?可见光谱仪监测DNA溶液在有无共同物存在下，在260 nm处的接收峰强度的变革。