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基础医学论文:弓形虫ONA的提纯及其性质的研究
弓形虫ONA的提纯及其性质的研究
| 文章出自:论文无忧网 | 编辑:发表咨询 | 点击: | 2012-07-30 14:57:19 |

      中国兽医科技1991年第21卷第7期残留虫体全都存活,表明该药对上述3种虫体效果不佳或无效。对捻转胃线虫、食道口线虫、仰口线虫的驱虫率分别为67.77%、67.72%、39.62%,与张勤等试验结果差异很大,这可能与荷虫量较大有关。此外还发现对肺丝虫、绦虫无效。 2.丙硫咪哩为我国7。年代末问世的广谱驱虫药,本试验表明10一15mg/kg对肝片形吸虫、捻转胃线虫、食道口线虫和仰口线虫效果确实,驱虫率达100%,但对肺丝虫、毛首线虫、胰阔盘吸虫无效,对前后盘吸虫、绦虫效果不佳。 3.试验结果表明,两种药物对我省分布范围广、危害严重的肝片形吸虫、捻转线虫、食道口线虫、仰口线虫都有较好的驱杀效果,且毒性低,安全范围大,适于基层推广使用。朴本实验得到省壮草种籽场罗茨毕、谢继石; 省畜牡局李通权;独山县程荣生的大力支持和协助,本文承蒙省兽防站高级兽医师杜玉盘修改谨一并致谢。弓形虫ONA的提纯及其性质的研究干小仙沈丽英袁行政丁建祖宋昌存 (浙江医学科徽院寄生虫病研究所,杭州) 为建立提取弓形虫DNA的简便方法,我们于 1989一1990年进行了本项研究。

      (一)材料和方法 1.虫株:弓形虫(Toxoplasmagondii) ZA株,从浙江病猪体分离所得,由本所传代保存。 2.弓形虫滋养体的纯化:取含滋养体的小鼠腹腔液,离心沉淀,经PBS洗涤2~3次后,加 3。一40倍体积的0.25%胰蛋白酶磷酸盐缓冲液, 37℃水浴中消化20分钟;再用PBS离心洗涤4~5 次,以除去胰蛋白酶液。最后在沉淀物中加少量 PBS稀释,取少许涂片镜检纯化效果。 3.弓形虫DNA的提取:将纯化的弓形虫滋养体悬液稀释至一定密度(OD值约为2.0)后,加入 SDS使成2%终末浓度,混匀,置40℃水浴中作用1 小时,充分裂解虫体。按Myers,W.T.等(2950) 介绍的苯酚一氯仿提取法得到粗制核酸。将粗提核酸溶于Tris一EDTA(TE)液中,加入热处理后的 RNase至终浓度为50一100乒g/ml,37℃水浴中孵育]小时;然后用2.5倍体积的预冷95%乙醇沉淀获得纯化的DNA;并将其溶解于SSC或TE溶液中,保存于4℃或一2。℃备用。 4.DNA合量及纯度测定:①按紫外吸收法测定核酸含量,OD,6。/OD:8。>2.。,应用公式 DNA(卜g)=OD:。。义sox稀释倍数x休积计算总含量。样品溶液在200一3。。nm范围内作光谱图,观察曲线形状,记录26onm和28。二In二峰的 OD值。②按牟兆钦等(1984)的方法进行琼脂糖凝胶电泳,观察分析提取液的DNA纯度。 5。DNA的Tm值及G+C%含量的刚定和计算:按林万朋等(1982)的热变性法测定DNA的 Tm值。稀释液用SSC,比色杯为1cm,波长为 260nm。然后按公式(G+C)%=(Tm一53.9)x 2.44示十算(G+C)%值。

      (二)结果 1.用胰蛋白酶消化腹腔液纯化的弓形虫滋养体经直接涂片镜检表明细胞完整无损,且未见宿主细胞混杂。 2.提取的弓形虫DNA纯度高,样品光谱图光滑且有规律,为典型的核酸图谱(见图1)。 OD:。。/OD。8。>2.0;在琼脂糖凝胶电泳中呈- OD0D 0 . 300十 0.275 0.250 200300nm60708090“C 圈1ZA株弓形虫ONA光讼吸收田圈之ZA株弓形虫ONA热变性曲图38中国兽医科技1991年第21卷第7期条比较均一的DNA带。·体DNA和宿主细胞的DNA,纯度高达90%。本实 3.弓形虫ZA株DNA热变性过程中,始变验用胰蛋白酶消化法获得99%以上纯化滋养体,从温度约为65℃。根据连续升温(0.5℃/m她)测定而提取的DNA纯度高,与Johnson的实验结果相的0D26。值,以ODZ。。对变化温度绘制成DNA的符。但Johnson的操作复杂,技术设备要求高,一热变性曲线,求曲线中点,相对应的温度即Tm为般实验室难以应用。本实验的操作简便,适宜于一 74.3℃(见图2)。经代入公式计算,G十C的含般实验使用。量为49.8%。2.弓形虫DNA的G+C含量为49.8%,

      (三)讨论链DNA结构推算T十A的含量为50.2%,与国外文 1.据McCutchan,T.E.等(1984)报道,用献报道基本相同。与其它原虫DNA相比,弓形虫含1%宿主细胞的虫液提取的DNA纯度仅为50%。DNA的G十C含量较高,DNA双链内的氢键相应 Dahi,R.J.等(1983)用3卜m的微孔滤膜过滤地也多,故双链较稳定,测得的Tm值高,即热稳法获得99%纯化滋养体。Johnson,A.N.等(1986)定性好。这些结果为进一步研究弓形虫基因组和设曾用等密度梯度超速离心法分离RH株弓形虫滋养计分离基因等提供了有价值的参考资料。葱蜜酒剂对高血钙家兔病理损害的观察汪开毓汪明月王天益柳仲华丁衡君毛健宇 (四川农业大学,雅安) 葱反蜂蜜之说古言颇多,如说:碎,按1:1:1与蜂蜜和白酒混合后分别浸泡7 “生葱不可共蜜食之,杀人”明代的中指出“葱白畏蜜,同食杀人,多食则伐气4.服法与剂量:采用灌胃法,按每公斤体重昏神”。清代也指出:“葱同蜜食,30ml的剂量分别给家兔服下。如同杀人,以蜜性最胀,葱性最发,同葱则胀益5.兔高血钙促成法:参照高晓山等的方法,将发,而不可解,不死何待”。

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