本文作者：张伟 陈明人 熊俊 单位：江西中医学院附属医院
支气管哮喘简称哮喘，是抗原性或非抗原性刺激引起的一种气管－支气管反应所致的气道阻塞性慢性炎性疾病，气道高反应性和可逆性气流受限是其病理特征［１］，由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和Ｔ淋巴细胞等多种炎性细胞参与其炎性反应过程［２］。针灸治疗哮喘近年来取得满意的疗效，对其治疗机制的研究主要涉及：①改善通气功能［３－４］：针灸可通过对机体的调节作用促进气道炎性反应病理过程的改善，减少哮喘发作；②控制炎性反应：针灸疗法通过控制炎性细胞［５－６］、细胞因子［７－８］、炎性反应介质［９－１０］来达到控制哮喘的目的；③调整免疫功能［１１－１２］：针灸对于改善哮喘的多种免疫指标有重要意义；④影响神经－内分泌网络［１３－１４］：针灸通过改善神经生长因子、血浆Ｐ物质等神经递质的含量，影响神经－内分泌－免疫系统，从而达到免疫应答平衡状态，起到治疗哮喘的目的。本研究拟通过观察悬灸“大椎”穴不同灸量对哮喘大鼠血清白细胞介素４（ＩＬ－４）、γ干扰素（ＩＦＮ－γ）、免疫球蛋白Ｅ（ＩｇＥ）含量的影响，探讨悬灸“大椎”穴治疗支气管哮喘的细胞免疫调节机制以及艾灸治疗哮喘的最佳灸量。
１材料与方法
１．１动物与分组ＳＰＦ级ＳＤ雄性大鼠６０只，体质量２２０～２５０ｇ，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：ＳＣＸＫ（湘）２００９－０００４。动物在实验前适应性驯养１周，饲养环境为江西中医学院热敏灸重点实验室，室温２５℃，空气湿度为５０％，通风条件良好。按随机数字表法将动物分为空白对照组、模型组、治疗组１、治疗组２、治疗组３、治疗组４，每组１０只。
１．２主要试剂和仪器大鼠ＩＬ－４、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ酶联免疫吸附试剂盒（上海伟进科技有限公司），卵清蛋白（Ｓｉｇｍａ公司生产，北京索莱宝科技有限公司分装），氢氧化铝干粉（５００ｇ／瓶，广州化学试剂厂），超声雾化器（型号：４０２ＡＩ，上海鱼跃医疗设备有限公司），酶标仪（型号：Ｍｕｌｔｉｓｋａｎｍｋ３，芬兰雷勃公司），艾条（４ｍｍ×１０ｍｍ，江西省中医院生产）。
１．３造模方法［１５］大鼠于第１、８天腹腔注射致敏混悬剂（含卵清蛋白１００ｍｇ、氢氧化铝干粉１００ｍｇ、灭活百日咳杆菌５×１０个）１ｍＬ；第１５天开始用１％卵清蛋白生理盐水雾化吸入激发哮喘，每天上午９时进行，每日１次，每次２０ｍｉｎ，共７ｄ。空白对照组用注射用水代替卵清蛋白液进行注射和雾化吸入。
１．４造模成功标准以大鼠出现烦躁，呛咳，打喷嚏，呼吸频率加快、幅度加大，腹式呼吸明显和点头运动，严重者呼吸减慢或节律不整，四肢瘫软，行动迟滞或俯伏不动，反应迟钝等症状为激发成功。
１．５艾灸方法入组２１ｄ后开始介入艾灸治疗。用固定夹将大鼠固定后，选取“大椎”穴（第７颈椎与第１胸椎之间背部正中）。用１支艾条悬于“大椎”穴上约２ｃｍ处先回旋灸２ｍｉｎ预热局部皮肤，再固定于“大椎”穴施行温和灸，以操作者将食指放于“大椎”穴处有温热感为宜。每日于早９：００起，分别对治疗组１悬灸１５ｍｉｎ，治疗组２悬灸３０ｍｉｎ，治疗组３悬灸１ｈ，治疗组４悬灸２ｈ，共治疗７ｄ。
１．６样本采集及检测治疗结束２ｈ内，将所有大鼠乙醚麻醉后于股动脉取血并处死。采血５ｍＬ，室温自然凝固１０～２０ｍｉｎ，离心２０ｍｉｎ（２５００ｒ／ｍｉｎ），收集上清液。大鼠ＩＬ－４、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ含量采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法检测。
１．７统计方法所有数据用平均数±标准差（ｘ珚±ｓ）表示。用ＳＰＳＳ１３．０统计软件包处理，进行多个样本均数的方差分析以及均数间两两比较（ＳＮＫ－ｑ检验），如果出现方差不齐，经数据转换后使方差齐，再进行检验。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义的标准。
２结果
２．１各组血清ＩＬ－４、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ含量比较结果见图１。模型组大鼠血清中ＩＬ－４、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ含量明显高于空白组（均Ｐ＜０．０１）；各治疗组ＩＬ－４、ＩｇＥ含量明显低于模型组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），治疗组４ＩＦＮ－γ含量明显高于模型组（Ｐ＜０．０５）；治疗组１、２、３之间ＩＬ－４、ＩｇＥ含量比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），治疗组３与治疗组４比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。
２．２各组血清ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４比值比较图２结果表明，大鼠血清ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４比值模型组明显低于空白组（Ｐ＜０．０１），各治疗组显著高于模型组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），且治疗组１、２、３之间比较差异有统计学意义（均Ｐ＜０．０１），治疗组３与治疗组４比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。
３讨论
哮喘的发病机制目前不十分清楚，公认与变态反应、气道炎性反应、气道反应性增高三方面有关。在变态反应中体液免疫和细胞免疫均参与哮喘的发病。细胞免疫学机制被认为是哮喘发作的重要机制之一，Ｔｈ１／Ｔｈ２（辅助性Ｔ淋巴细胞）功能失衡介导了哮喘ＩｇＥ依赖的速发型变态反应及以嗜酸性粒细胞浸润为主的慢性气道炎性反应［１６－１８］。其机制为：Ｔｈ０细胞越来越多地向Ｔｈ２亚群分化［１９］，变应原特异的Ｔｈ２克隆分泌ＩＬ－４，抑制Ｔｈ１分泌ＩＦＮ－γ，刺激Ｂ细胞产生大量ＩｇＥ。ＩＬ－４的作用是促进肥大细胞的生长，促进ＩｇＥ的合成［２０－２２］；ＩＦＮ－γ主要由Ｔｈ１细胞分泌，在许多方面与ＩＬ－４具有对抗作用，对Ｔｈ２细胞起免疫下调作用［２３］。本研究以ＩＦＮ－γ细胞因子代表Ｔｈ１细胞，ＩＬ－４细胞因子代表Ｔｈ２细胞。实验结果显示，哮喘组出现了Ｔｈ亚群的失衡，使原来偏向于Ｔｈ１的平衡向Ｔｈ２方向转变；经悬灸“大椎”穴治疗后，Ｔｈ亚群失衡现象显著改善，这可能是艾灸减轻哮喘炎性反应的机制之一。灸量与灸效关系十分密切，灸量的充足与否直接影响临床疗效。然而灸量的多少从来都无统一定论，医生多根据个人的临床经验而定。陈日新教授提出了“饱和灸量”的概念［２４］，即指“每次每穴的施灸量以该穴热敏灸感消失为最佳灸疗剂量，这是个体化的最佳充足剂量”。然而个体化的饱和灸量并非完全没有规律可循，经过统计学的分析，每个病种都可找到最佳灸疗时长，即在此时间长度对大多数病人来讲是最佳治疗时间长度，即最佳灸量。通过灸量的标准化研究，可简化临床操作程序，降低误差，提高效率。本文结果说明，随着灸时的增加，悬灸对哮喘大鼠细胞免疫机制的改善作用也在增加，悬灸１ｈ是较佳时长。杞锦政［２５］在热敏灸治疗哮喘的试验中得出哮喘患者个体化的饱和灸量平均治疗时间为（５９．６１±１２．１２）ｍｉｎ，这与本研究的结果不谋而和。
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