本文作者：程 凯 周 静 田素领 单位：北京中医药大学针灸推拿学院
围绝经期综合征［1］(premenstrualsyndrome，PMS)是由于卵巢功能退行性改变引起下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴的功能失调，从而出现以植物神经功能紊乱为主且伴有心理症状的一系列证候群，如出现阵发性潮热、心悸、出汗等症状，或伴有恐惧、焦虑、抑郁等心理反应。在中国，约有85%～90%的围绝经期妇女有不同程度的症状表现，一般持续1～5年，10%～20%的妇女甚至可持续终身［2］，严重危害广大妇女的身心健康，影响其工作、生活及社交等诸多方面，也给家庭和社会造成巨大负担。雌二醇(E2)是围绝经期妇女内分泌改变的非常敏感的标志物［3，4］，E2分泌减少是围绝经期女性内分泌改变的必然趋势。针灸调节女性内分泌具有有效、简便、安全、无副作用的优点，为越来越多的人们所接受。我们的前期临床试验表明，电针三阴交穴能够降低围绝经综合征患者的kupperman停经指数积分，对女性围绝经期所出现的烘热汗出、失眠、急躁易怒、手足心热、忧郁、头痛、心悸等诸多症状的改善有一定的特异性。动物实验也证实，电针三阴交穴可以提高随后去势大鼠子宫的E2水平。但雌激素效应的发挥不仅受E2浓度的影响，也取决于ER水平的表达，所以我们推测电针三阴交改善围绝经期女性诸多症状的起效因素必然存在雌激素受体(ER)的高表达。故本实验通过观察电针三阴交对随后去势大鼠子宫ER水平的影响，初步探讨逆针三阴交穴改善女性围绝经期综合征的作用机制。
1材料与方法
1.1动物及分组3月龄SD雌性大鼠40只，清洁级，体重220g±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司(SCXK(京)2006-0008)，在温度20℃±2℃、湿度65%、12h光暗周期的条件下喂养。将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、逆针三阴交组4组各10只。
1.2仪器与试剂毫针(直径0.35mm、长25mm)由苏州环球针灸医疗器械有限公司生产。韩氏电针仪，北京华卫公司。试剂:ER酶免试剂盒购自北京博惠嘉业生物医学科技有限公司。
1.3取穴及治疗穴位定位和刺法参考林文注主编的《实验针灸学》教材。三阴交穴:大鼠后肢内踝尖直上10mm。逆针三阴交组，选取双侧三阴交穴直刺3mm。连接韩氏电针仪，疏密波，频率2/100Hz，强度以针柄轻微抖动为宜，每次20min，隔日1次，共治疗15次。其他各组常规饲养，隔日抓取。
1.4模型制备
1.4.1去卵巢大鼠10%水合氯醛(3.5mL/kg)腹腔注射麻醉，俯卧固定，取最末肋骨下、腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处，剪除长毛，用碘酒及75%酒精消毒，于无菌条件下切开皮肤和背肌约1.5cm，视野下可见白色发亮脂肪团，卵巢包埋于脂肪团中。用镊子将脂肪团拉出切口外，分离脂肪团即可见黄红色的卵巢。将卵巢下输卵管(包括脂肪)用丝线结扎，摘除卵巢。止血后，将子宫送回腹腔内，将肌肉层、皮层分别缝合。同法切除对侧卵巢。术后连续3d，每天用青霉素20万U/次肌注，每日1次，连续3d，以防感染。术后第5天开始作阴道涂片检查，连续7d。大鼠阴道涂片均以多核白细胞为主，散在分布少量上皮细胞，呈间情期，为去卵巢大鼠模型成功的标准。
1.4.2假手术大鼠不摘除卵巢，仅切除卵巢周围少量脂肪，其余操作同“1.4.1”。
1.5材料处理大鼠快速断头，鼠体解剖腹腔取左侧段子宫，将组织用滤纸擦拭干净，液氮保存。组织精密称重后，放入匀浆管中，按1∶9的比例加入0.9%生理盐水，充分研碎使组织匀浆化。将匀浆液移入EP管，置于低温(4℃)离心机中充分离心(3500r/min，15min)，取上清液，-80℃冰箱中待测。
1.6指标检测ER采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定，按试剂盒说明书操作程序进行。
1.7统计学方法实验数据采用均数±标准差(x珋±s)表示。应用SPSS统计软件，组间差异采用方差分析(One-WayANOVA)，以P＜0.05为显著性差异的标准。
2结果
与正常组比较，假手术组子宫ER含量无明显变化(P＞0.05)，模型组ER含量显著降低(P＜0.01)。与模型组比较，逆针三阴交组子宫ER含量均显著升高(P＜0.01)，但2组间无明显差异(P＞0.05)。3讨论《素问•上古天真论》记载了女性的生长发育过程以及女性生殖机能的成熟与衰退规律:“女子七岁，肾气盛，齿更发长……七七，任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通，故形坏而无子也。”可见女性进入老年期后肾气不足、冲任虚衰、天癸衰竭等变化与围绝经期综合征的发生发展有着密切的联系。1983年，杨家林教授首次提出“肾-天癸-冲任-胞宫轴心”之说［5］:七七之后，肾气偕天癸由盛实、盛极直至衰退，女子经闭，生育能力丧失，机体进入衰老阶段。这一系列过程的内在变化机制完全由肾-天癸-冲任-胞宫的“性生殖链”在起作用。肾、天癸、冲任在整个生殖系统调节中各司其职又相互联系、相互作用，形成女性生殖生理轴，协同完成生殖系统的功能。天癸源于肾之先天之精，二七肾气盛时，天癸才能产生。有学者认为［6，7］，天癸相当于下丘脑-垂体分泌的促性腺激素释放激素和促性腺激素，不但促进生殖机能的成熟，而且维持其功能正常，其作用特点与现代医学下丘脑-垂体-卵巢轴(HPO轴)极为相似。围绝经期是妇女自生育旺盛的性成熟期到老年期的过渡阶段，涉及多系统功能紊乱，生理病理变化以肝、脾、肾等脏腑功能失调为本。三阴交穴为足太阴脾经、足厥阴肝经与足少阴肾经的交会穴，肾藏精，肝藏血，精血同源，故肝肾合称为先天之本;脾统血，为气血生化之源，乃后天之本，故三阴交可交通足三阴经，补益先后天。卵巢是雌激素分泌的主要来源，子宫为雌激素的主要靶器官，其生长发育依赖于雌激素的作用。雌激素效应的发挥不仅受E2浓度的影响，也取决于ER水平的表达［8］。雌激素进入细胞后通常与受体结合，形成雌激素-受体复合物再进入细胞核，诱导功能不同的蛋白质合成，产生不同的生物化学效应。对于围绝经期女性来说，卵巢功能的衰退、雌激素分泌水平的下降是必然趋势，不可逆转。但前期临床试验证实，电针三阴交可以改善女性围绝经期的诸多症状，结合前期动物试验及本实验，说明电针三阴交在提高子宫E2含量的同时，也提高了子宫ER水平，以提高雌激素的利用率，使有限的雌激素发挥更大的生物学效应。三阴交的刺激方式是否对该实验结果有绝对影响，有待进一步研究，故后期可以采用逆针和逆灸的方式进行对比研究。
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