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[摘

【摘要】目的研究鳍肠属植物鳗肠水溶性部位的化学成分及其药理活性。方挂通过溶剂提取法和色谱技术分离化学成分，运用光谱手段进行结构鉴定，利用C6细胞和PclZ细胞观察鳗肠水溶性成分对细胞增殖活性的抑制作用。祛果从该部位分离得到3个三菇皂昔，分别为3一0一日一D一毗喃葡糖刺囊酸(I)、3一0一p一D一毗喃葡糖刺囊酸一28一仆卜D一毗喃葡糖昔(n)和3一o一(2一0-硫酞基，p一D一毗喃葡糖)刺囊酸(l)，还分离得到了豆街醇(W)和蜂蟆菊内醋(V);化合物l具有抑制C6细胞和PC12细胞增殖的活性。祛伦化合物I是鳗肠水溶性部位抑制细胞增殖的活性成分。

【关键词】鳗肠;三菇皂昔;胶质瘤C6细胞;抑制增殖

菊科鳄肠属植物鲤肠(EeliPta尸rostrataL.)为常用中药，其干燥地上部分称墨旱莲。鲤肠主要分布于热带和亚热带地区，我国主产于江苏、浙江和广东等省。药典记载墨旱莲具有滋肝补肾、凉血止血之功〔’〕。鲤肠具有保肝、抗蛇毒、免疫调节、抗诱变等多种药理活性，在临床上可用于治疗菌痢、生殖泌尿系统炎症和肝硬化等症，鲤肠与其它药材合用还可以对抗链霉素毒性反应、治疗脂溢性脱发和多种出血症。化学成分研究表明，鲤肠除含有特征的化学成分多联噬吩和香豆草醚类外，还含有三菇皂贰、生物碱及黄酮等类型化合物。我们在预实验中发现鲤肠的极性部位具有影响细胞增殖的活性。作为嫂肠系统研究的一部分，本文重点研究鲤肠水溶性部位的化学成分及其药理活性。

仪器材料熔点用Kofler熔点仪测定(温度计未经校正);紫外光谱用岛津UV一100紫外可见分光光度计测定;质谱用Ionspee(4.7Tesla)FT一MS和Hp5989A质谱仪测定;红外光谱用NieoletMagnaIR傅里叶变换红外光谱仪测定;核磁共振谱用BrukerAM一300核磁共振仪和VarianUnity一Inova500核磁共振仪测定;全自动酶标仪为美国产Bio一Rad550型;荧光倒置显微镜为日本产Olympllslx一51型。

柱层析所用硅胶为卜海杜园精细化工有限公司的硅胶(粒度100一200目);薄层层析板购自烟台汇友硅胶开发有限公司;大孔树脂slP一1400系上海医药工业研究院产品;胎牛血清购自杭州四季青生物E程材料有限公司;多聚赖氨酸和甲基曝哇基四哇(methylthiagolyltetragolium，MTT)购自Sigma公司;DMEM培养基、胰蛋白酶和马血清由Gibco公司提供;二甲亚飒(DMSo)由上海生物工程技术服务有限公司提供;大鼠脑胶质瘤C6细胞购自中科院上海分院细胞库;PC12细胞由上海第二医科大学神经生物学教研室惠赠。实验所用生药购于上海药房股份有限公司徐重道中药饮片厂，经上海第二医科大学药物所张敏老师鉴定为鲤肠。

提取分离干燥鲤肠药材skg，用80%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏9089。浸膏用水溶解，用石油醚、二氯甲烷和正丁醇依次萃取。正丁醇部位(56.79)经大孔树脂柱分离，水-乙醇梯度洗脱(水一95%乙醇)。95%乙醇洗脱部位(10.49)经硅胶柱、反相C，。Flash柱反复层析，得化合物I(398.3mg)、11(91.7mg)。50%乙醇部位(10.99)进一步经大孔树脂柱层析得Fr、(45%乙醇洗脱)、F几(95%乙醇洗脱)。Fr，(1.259)硅胶柱层析，二氯甲烷一甲醇一水(5:1:0.1)洗脱部位，通过反相Cl。Flash柱层析，40%甲醇洗脱，分离得化合物111(16.8mg)。Fr，(0.899)经硅胶柱层析，正己烷-乙酸乙酷(80:l)洗脱，分离得化合物W(10.2mg)。70%乙醇部位(1.439)经硅胶柱层析，二氯甲烷一甲醇(8:l)洗脱，分离得化合物V(43mg)。

C6细胞增殖抑制实验取对数生长期C6细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，吹打，10%胎牛血清和DMEM培养基配制成单细胞悬液(10，/mL)，每孔100卜L加人%孔板中，分为实验组(药物浓度为2、10、50、100卜mol」/I·)和空白对照组。细胞置于5%COZ培养箱中37℃培养，观察细胞生长状况。培养24h后，分别用于形态观察和MTT实验。形态观察用荧光倒置显微镜观察药物作用组与对照组细胞形态。MTT实验分别加人MTT10卜L/孔(5mg/mL)，继续培养4h，吸去培养液，加人100卜LDMSo，培养板振荡5min，显微镜下着色颗粒消失，20min内以570nm为测试波长，630nm为参考波长，在全自动酶标仪上读取各孔吸光度(A值)，每组6孔。空白对照组oD值为100%，各实验组占其百分比即为各组细胞存活率。

PC12细胞增殖抑制实验取对数生长期PC12细胞，吹打，5%胎牛血清、10%马血清和DMEM培养基配制成单细胞悬液(10’/mL)，细胞悬液按每孔100林L加人多聚赖氨酸包被的%孔板中，实验的其余操作同“C6细胞增殖抑制实验”)诱导PC12细胞分化实验取对数生长期PC12细胞，吹打，5%胎牛血清、10%马血清和DMEM培养基配制成104/ml单细胞悬液，按每孔lml加入多聚赖氨酸包被的24孔板中，分为实验组(药物浓度为2、10、50、100林mol/L)和空白对照组，培养24h后荧光倒置显微镜观察细胞生长状况。