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摘 要:目的测定海洋星虫提取物的蛋白质、氨基酸和微量元素含量,并初步观察其对小鼠免疫功能的影响。方法采用盐溶液抽提、超滤、乙醇沉淀等步骤,从海洋星虫制备得到海洋星虫提取物,分别采用凯氏定氮法、氨基酸自动分析仪和等离子体发射光谱仪测定蛋白质含量、氨基酸组成和微量元素水平。结果海洋星虫提取物的蛋白质含量为55.3%,含牛磺酸、赖氨酸、精氨酸等18种氨基酸和Zn、Cu、Ge、Se等7种微量元素。动物实验表明,海洋星虫提取物能显著提高小鼠的胸腺指数和脾指数,促进脾脏T淋巴细胞转化。结论海洋星虫提取物营养丰富,能明显提高机体的免疫功能。
关键词:星虫;蛋白质;氨基酸;微量元素;免疫调节
海洋星虫(Sipunculidae)又称沙虫、沙肠子、泥蒜、土蒜,属于星虫科,形状大致如蚯蚓,体色红中带乳白,体长100~200 mm,纵筋层囊和环棘层囊交叉,基盘如目状。生活在潮间带泥沙底质的海域。
现代医学研究表明星虫含有多种活性物质,能够调节机体多种机能,含有丰富的蛋白质、微量元素等,具有显著的延缓衰老、抗氧化、抗疲劳、耐缺氧、耐高温及促进小鼠乳汁分泌等功效。研究证明,海洋星虫提取物具有抗疲劳和延缓衰老的功能[1]。本文从海洋星虫制备得到海洋星虫提取物,测定了该提取物的蛋白质含量、氨基酸组成及微量元素含量,并进行了初步免疫调节功能观察。
1 材 料
新鲜海洋星虫,购自厦门沿海,由上海水产大学伍汉霖教授鉴定;牛血清白蛋白、Con A、溴化四唑蓝(MTT),美国Sigma公司;RPMI 1640培养基,美国Scientific公司;小牛血清,上海华美生物工程公司。ICR小鼠,雄性,18~20 g,清洁级,上海西普尔-必凯实验动物有限公司。
2 方法和结果
2.1 海洋星虫提取物的制备取海洋星虫1 kg,清水洗净,制成匀浆,加入0.1mol/LNaCl至5 000 ml (含10 mmol/L磷酸盐缓冲96中国生化药物杂志Chinese Journal of Biociemical Pharmaceutics 2004年第25卷第2期液),提取24 h,8 000r/min离心30 min,得上清,沉淀再用碱提2 h,稀酸中和后,离心得上清,合并两次上清液,用板式超滤器加截留相对分子质量为10万的超滤膜超滤,滤液用70%乙醇沉淀,冷冻干燥,得灰白色无定形粉末80 g,即为海洋星虫提取物。
2.2 蛋白质含量测定
采用食品中蛋白质测定标准(GB/T14771-1993)测定,结果显示,海洋星虫提取物蛋白质含量非常高,为553 mg/g,即55.3%。
2.3 氨基酸含量测定采用氨基酸自动分析仪测定,由中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所协助完成。结果见表1。海洋星虫提取物含有18种氨基酸,其中7种人体必需氨基酸含量较高,牛磺酸及精氨酸的含量也很高。
2.4 微量元素测定按食品中微量元素测定标准(JY/T015-1996)测定。采用P-4010等离子体发射光谱仪测定,由复旦大学分析测试中心协助完成。海洋星虫提取物含Cu、Zn、Ge、Se、Co、Fe、V等7种微量元素,其含量分别为:8.0、230、13.1、7.86、0.25、0.536、0.45μg/g。其中Zn、Cu、Ge、Se的含量较高,尤其是Zn的含量高达230μg/g。
2.5 海洋星虫提取物对小鼠体重、胸腺指数、脾指数及脾淋巴细胞转化率的影响小鼠40只,随机分成4组,设生理盐水对照组和海洋星虫提取物低、中、高3个剂量组,剂量分别为0.04、0.20、1.0 g/(kg·d)),连续灌胃20 d,于末次给药后次日脱颈处死动物,称重,无菌取出脾脏和胸腺,分别精确称量,以胸腺及脾脏重量除以小鼠体重计算胸腺指数和脾指数。采用MTT法[2]进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,结果见表2。给小鼠灌胃20 d后,海洋星虫提取物对小鼠脾脏和胸腺重量指数有显著增强作用,高剂量组P值均小于0.01;能显著促进小鼠淋巴细胞转化,给药剂量为0.2 g/(kg·d)时显著提高淋巴细胞转化率(P<0.05),给药剂量为1.0 g/(kg·d)时非常显著提高淋巴细胞转化率(P<0.01)。说明海洋星虫提取物对机体免疫功能具有显著地促进作用。
3 讨 论表
本文的海洋星虫原料来自厦门沿海,其提取物蛋白质含量高达55.3%,富含牛磺酸(3.12%)、精氨酸(6.72%)及人体必需氨基酸,此外,Zn、Cu、Ge、Se等多种微量元素含量也很高,尤其是Zn高达230μg/g。现代医学研究表明,牛磺酸、精氨酸等氨基酸对机体免疫具有明显的调节作用,具有抗疲劳及延缓衰老的作用,Zn、Fe、Cu、Ge、Se、Co等多种微量元素对机体的免疫功能具有明显的调节作用[3]。本研究发现,海洋星虫提取物可显著增加小鼠胸腺指数和脾指数,提高脾脏T淋巴细胞的转化率,提示对机体的免疫功能具有明显的促进作用,这可能与其含有较高人体必需微量元素及较高的牛磺酸、精氨酸和多种人体必需氨基酸有关。但本文只是初步观察了海洋星虫提取物对小鼠免疫功能的调节作用,要明确海洋星虫提取物的免疫调节功能及其作用机理,尚需进行更深入的研究。
参考文献:
[1] 沈先荣,蒋定文,贾福星,等.海洋星虫提取物的抗疲劳作用研究[J].中华航海医学与高气压医学杂志,2003,10(2):112-114.
[2] 蒋定文,沈先荣,贾福星,等.角燕制剂对小鼠免疫功能的调节作用[J].中国生化药物杂志,2002,23(3):119-121.
[3] 瞿明仁,黎观红.微量元素对动物免疫功能的影响及作用机制[J].江西农业大学学报,1998,20(4)472-475.
