根据专家观察，这样的理论和现象都是值得各位作者朋友深思学习的，所以希望大家多做研究学习，争取总结出更多更好的经验!

摘　要　本文探讨了金葡菌L型和结核菌L型感染荷瘤小鼠癌基因P21、P53及C-erbB-2产物的表达。结果发现感染小鼠上述癌基因产物水平较对照组小鼠明显升高（0.01<P<0.05）；实验组PCNA阳性细胞指数高于对照组（P<0.05）；荷瘤感染小鼠存活期缩短，自发性肿瘤增多（P<0.05）。提示细菌L型感染与肿瘤的发生、发展有关。

关键词　金葡萄L型　结核菌L型　肿瘤　癌基因　

PCNA我们应用ras癌基因蛋白产物P21、P53及C-erbB-2以及增殖细胞核抗原（PCNA）对金葡菌、结核杆菌及其L型感染荷瘤组和荷瘤非感染组C57BL/6N小鼠的肿瘤组织进行检测，企图探讨癌基因蛋白产物及增殖细胞核抗原在小鼠肿瘤中的表达及意义。

材料和方法

1.1　菌种：金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）、结核杆菌及其L型由本院微生物教研室提供。

实验动物及肿瘤株：肺腺癌株（louse）由中科院上海动物中心提供。C57BL/6N 6～8周龄小鼠由安徽医科大学动物中心提供，雌性80只、雄性40只，体重18.5%～21g,随机将雌、雄按2∶1分为8组，每组15只。1）荷瘤伴金葡菌L型感染组（TSL组）。

荷瘤伴金葡菌感染组（TS组）。3）金葡菌L型感染组（SL组）。4）金葡菌感染组（S组）。5）荷瘤伴结核菌L型感染组（TBKL组）。6）荷瘤伴结核菌感染组（TBK组）。7）单纯荷瘤组（T组）。8）正常对照组（C组）。首先在TSL组、TS组、TBKL组、TBK组和T组小鼠左前腋部皮下植入louse肺腺癌组织4mg。1周后见种植瘤组织处有小肿块隆起，并分别于小鼠尾静脉注射金葡菌2×106/ml,金葡菌L型2×107/ml,每次注射0.2ml（亚致死量），每周1次，共12次。腹腔注射结核杆菌结核杆菌L型10mg/0.2ml。为防止L型回复，每次注射金葡菌L型同时给予肌肉注射苯唑青霉素3000u/0.2ml,注射结核杆菌L型同时给链霉素300u/0.2ml,每天注射2次，连续3天。荷瘤非感染组仅种植肿瘤，为非感染对照组；正常对照组每次仅尾静脉注射无菌生理盐水。待小鼠自然死亡或处死后，取心、肺、肝、脾、肾、脑及生殖器官和肿瘤组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片HE染色，光镜观察。

免疫组化染色（ABC法）：所有荷瘤组小鼠的肿瘤组织和金葡菌及其L型感染所引起的自发性肿瘤组织均作癌基因蛋白产物P21、P53及C-erbB-2和PCNA染色。第一抗体、第二抗体和ABC均为（DAKO公司产品），并没省略对照。PCNA标记阳性细胞核呈棕黄色，阴性则不显色，增殖活性分级方法如下：1）同低倍镜观察最清楚的视野，各例观察1000个肿瘤细胞，PCNA阳性指数以百分率表达。

按照增殖指数的高低对肿瘤进行分级，增殖指数0～25%为Ⅰ级；26～50%为Ⅱ级；51～75%为Ⅲ级；76%以上为Ⅳ级。

结　果

2.1　感染对荷瘤小鼠生存的影响荷瘤伴感染组小鼠存活4～40天，平均25天，以TSL组为最短，平均仅存活22天。荷瘤非感染组小鼠存活21～55天，平均34.9天。

金葡菌及其L型感染组存活48～90天，平均80天。正常对照组存活90天被处死，经方差分析和均数两两比较q检验结果表明荷瘤伴感染组小鼠存活时间明显短于荷瘤非感染组、单纯感染和正常对照组，P<0.05～0.01。

荷瘤感染组和单纯感染组自发性肿瘤发生率组和S组，共有7只小鼠引起自发性肿瘤，其中4例为恶性，3例为良性肿瘤。TS组和TSL组，共有6只小鼠发生自发性肿瘤，其中5例恶性，1例为良性肿瘤。TBK和TBKL组3只小鼠发生自发性恶性肿瘤。单纯荷瘤和正常对照组，无自发性肿瘤发生，有明显统计学意义P<0.05。

PCNA在肿瘤细中表达阳性细胞呈棕黄色反应位于肿瘤的增殖细胞核中（图1），各癌巢中阳性细胞指数差异很大。癌周正常组织未见PCNA阳性细胞。荷瘤感染组Ⅰ～Ⅲ级13例（27.6%）；Ⅲ～Ⅳ级34例（72.4%）。荷瘤非感染组Ⅰ～Ⅱ级9例（70%）；Ⅲ～Ⅳ级4例（30%）。SL和S组引起自发性肿瘤均为Ⅱ～Ⅲ级。

三种癌基因蛋白在肿瘤组织中的表达荷瘤感染组小鼠肿瘤中P21、P53及C-erbB-2癌基因蛋白表达阳性分别为76.6%、80.9%、80.9%。三者同时阳性为48%。荷瘤非感染组P21、P53及C-erbB-2阳性率分别为38.5%、38.5%、42.2%。三者同时阳性为15.4%。荷瘤感染组明显高于荷瘤非感染组，P<0.05～0.01（附表）（图2）。

3　讨　论细菌及其L型感染荷瘤组小鼠存活时间明显短于荷瘤非感染组、单纯感染组和正常对照组P<0.05～0.01。荷瘤感染组、单纯感染组引起小鼠自发性肿瘤明显高于荷瘤非感染组和正常对照组，P<0.05。PCNA是一种36KD的核蛋白，它的出现与细胞周期中的DNA合成期（S期）有着密切的联系，表示细胞正处于活跃的核增殖状态〔1〕。本文荷瘤感染组小鼠肿瘤细胞内PCNA阳性细胞指数明显高于荷瘤·46·中国微生态学杂志1997年第9卷第5期非感染组，P<0.05。PCNAⅡ～Ⅲ级相当于P21和P53及C-erbB-2中度阳性，Ⅳ级相当于强阳性。所以将PCNA和癌基因结合起来研究，对肿瘤的发生、发展和预后将有一定的意义。

本文荷瘤感染组小鼠肿瘤内癌基因P21、P53和C-erbB-2阳性表达明显高于荷瘤非感染组，P<0.05～0.01。ras癌基因P21产物是癌基因家族编码的一种分子量21000的蛋白质，ras癌基因激活P21过量表达。ras在胃、肠肿瘤中阳性率各家报道不一〔2〕，通常为43.6～80.7%不等。本文荷瘤感染组癌基因P21阳性率76.6%,而荷瘤非感染组阳性率38.5%。P53癌基因的突变缺失或失活是许多肿瘤的发生原因〔3〕。P53癌基因蛋白检测结果：荷瘤感染组小鼠肿瘤P53阳性表达明显高于荷瘤非感染组，P<0.05。C-erbB-2癌基因蛋白与neu基因同源，要通过第164位氨基酸点突变，扩增而被激活〔4〕。已有大量研究资料证实C-erbB-2过度表达肿瘤预后较差。本文荷瘤感染组小鼠肿瘤中C-erbB-2阳性率明显高于荷瘤非感染组，P<0.05。以上三种癌基因蛋白在肿瘤组织中的阳性表达有协同关系。荷瘤感染组小鼠肿瘤内三种癌基因共同表达明显高于荷瘤非感染组，P<0.05。

研究结果表明荷瘤感染组小鼠存活时间短，预后差，可能与细菌及其L型感染导致PCNA指数增高，P21、P53及C-erbB-2高表达有关。金葡菌及其L型感染引起自发性肿瘤比正常对照组明显增高，这些均提示细菌及其L型感染与肿瘤的发生和发展可能有一定的关系。