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摘　要　盐酸诺氟沙星是一种氟喹诺酮类抗生素,已作为新一代蚕用抗生素应用。体外抑菌试验表明,在相同浓度下,盐酸诺氟沙星对家蚕3种病原细菌的抑菌效果好于氯霉素和红霉素;生物试验表明,该药对家蚕常见细菌病有较好的防治效果,并且对家蚕的生长发育及茧质均无不良影响;研究其在家蚕体内的药代动力学发现,盐酸诺氟沙星在家蚕食下0·25 h后进入血液,0·5 h后达到最大值,24 h后在血液中已检测不到。

关键词　盐酸诺氟沙星　家蚕　细菌病　药理学

家蚕细菌病是蚕业生产上的一种常见病害,不论春期还是夏秋期都有发生,给蚕茧及蚕种生产造成了严重损失。对于该病的防治,大多采用添食氯霉素或红霉素等抗生素的方法,但氯霉素因能引起再生障碍性贫血,在生物体内残留时间长,已被禁止用于食品动物;红霉素因在溶液中不稳定,使用受到一定限制。并且,由于这两种抗生素的长期使用,使家蚕病原细菌的耐药性增加而药效降低[1-3]。因此,研究选用新的抗生素用于家蚕细菌病防治很有必要。本试验通过几种抗生素对家蚕病原细菌的体外抑菌试验、生物试验及其在家蚕体内的药代动力学的研究,发现盐酸诺氟沙星的防治效果显著优于氯霉素和红霉素,是目前防治家蚕细菌病的一种理想药剂。

1　材料与方法

1·1　供试药品

硫氰酸红霉素(A),盐酸诺氟沙星(B),氯霉素 (C),均由山东农业大学动物保健品厂提供。

1·2　供试菌种

黑胸败血病菌(Bacillus bombysepticus)、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)、灵菌(Bacillus prodigiosus), 均由山东农业大学蚕病室继代保存,菌液浓度为 5·6×109、2·7×109、8×1010mL-1。

1·3　供试蚕品种

春·蕾×镇·珠。

1·4　盐酸诺氟沙星对3种家蚕病原细菌的抑菌试验

将供试药品分别配制成不同浓度(1 000、500、 250、125、50 mg/L)的溶液,在牛肉膏蛋白胨固体培养基上做抑菌试验,30℃恒温培养20 h,测量抑菌圈直径。

1·5　生物试验

1·5·1　盐酸诺氟沙星对家蚕细菌病的治疗效果　将4龄起蚕按每区30头分区,攻毒,分别于攻毒后 0、2、4、6、8 h添食500 mg/L的盐酸诺氟沙星。以氯霉素为对照药物,另设毒对和空对,每个处理设3 个重复。苏云金杆菌的攻毒方式采用食下感染,黑胸败血菌和灵菌的攻毒方式为皮下穿刺接种。分别于攻毒后20 h调查健蚕头数,计算治疗效果。

1·5·2　盐酸诺氟沙星对家蚕生长发育的影响　将3 龄起蚕按每区30头分区,添食盐酸诺氟沙星。添食方法:试验区3、4、5龄起蚕各添食1次,5龄隔天添食1次,对照区添食等量清水,每个处理设3个重复。调查食下量、消化量、眠蚕体重、龄期经过、熟蚕体重、全茧量、茧层量及茧层率等。

1·6　盐酸诺氟沙星的药代动力学试验采用HPLC法检测血清药物浓度[4-8]。

1·6·1　色谱条件　色谱柱:Shima DZUVP—ODS柱 (150 mm×4·6 mm,日本岛津公司产品)。流动相: 甲醇与0·05 mol/L柠檬酸+0·01 mol/L醋酸铵[V (甲醇)∶V(柠檬酸+醋酸铵)=25∶75],用三乙胺调 265pH至4·5,流速1·5 mL/min,柱温为常温,检测波长 275 nm,灵敏度0·06AUFS,进样量10μL。

1·6·2　血清制备及处理　取100头5龄健康起蚕, 其中20头正常饷食,取其血液作空白对照,另外80 头平均每头添食盐酸诺氟沙星40μg,分别于添食后 0·25、0·5、1·5、2、4、8、16、24 h各取10头采血, 方式为冰浴采血,采血前加入少量苯基硫脲防止氧化,采血后将血液立即冷冻储存备用[9]。将采集的血液在冷冻离心机中离心(4℃, 10 000 r/min)5 min,取上清液于另一离心管中,与甲醇按1∶2的体积比振荡混合1 min,离心(4℃, 10 000 r/min)3 min,取上清液进行高效液相色谱分析。

2　结果与分析

2·1　盐酸诺氟沙星对3种家蚕病原细菌的抑菌效果

由表1可以看出,相同浓度的盐酸诺氟沙星对苏云金杆菌和黑胸败血菌的抑菌效果好于氯霉素, 与硫氰酸红霉素相当;而对灵菌的抑菌效果要显著好于后两者。

2·2　盐酸诺氟沙星对家蚕细菌病的治疗效果为查明盐酸诺氟沙星对家蚕细菌病的治疗效果,采用攻毒后立即添食药物的方法,对其治疗效果进行了调查,结果见图1。从图1可以看出,盐酸诺氟沙星对家蚕3种常见细菌病均有较好的防治效果,健蚕率均达80%以上,明显好于对照药物氯霉素。

为查明盐酸诺氟沙星的有效治疗时间范围,我们进行了间隔不同时间添药试验,结果见图2。

由图2可知,盐酸诺氟沙星添食时间与家蚕感染病菌的时间间隔越短,治疗效果越好。若在攻毒后1 h添食,治愈率达80%以上,当间隔时间超过1 h后,治愈率则明显下降。

2·3　盐酸诺氟沙星对家蚕生长发育的影响

将不同浓度的盐酸诺氟沙星给家蚕添食,调查对家蚕生长发育、消化吸收和茧质的影响,结果见表 2-4。

由表2、表3和表4可以看出,添食一定浓度的盐酸诺氟沙星后,不仅对家蚕生长发育无不良影响, 而且能促进家蚕的摄食和消化,提高眠蚕体重和熟蚕体重,使全茧量、茧层量和茧层率也有一定程度的提高,其中尤以添食500 mg/L的盐酸诺氟沙星的处理组提高最为显著。

2·4　盐酸诺氟沙星的药代动力学试验

2·4·1　样品分离　盐酸诺氟沙星标准溶液和其血清溶液的色谱图见图3、4。从图中可以看出,盐酸诺氟沙星样品峰分离良好,其色谱峰的保留时间 (TR)为10·5 min,空白血清中的杂峰对盐酸诺氟沙星样品峰无干扰。