摘 要：目的：观察胰岛素抵抗大鼠海马神经元β淀粉样肽 （β-amyloid，Aβ）生成与其相关蛋白的表达及吡格列酮的干预效果。方法：48只6～8周龄的Wistar大鼠随机分为正常对照组（Control组）、吡格列酮对照组（Pioglitazone，PIO组）、胰岛素抵抗组（Insulin resistance，IR组）、吡格列酮-胰岛素抵抗干预组（Insulin resistance +pioglitazone，IR-PIO组），IR组和IR-PIO组饮用10%果糖水4周建立胰岛素抵抗模型，造模成功后，Pioglitazone组及IR-PIO组给予吡格列酮10 mg/（kg·d）灌胃，同时，IR组和NC组给于相同体积的生理盐水，共12周；免疫组织化学检测大鼠脑皮层Aβ42的蛋白表达；Western blotting检测大鼠脑皮质区APP、β分泌酶1（β-secretase，BACE1）、早老素（Presenilin，PS-1）、脑啡肽酶（Neprilysin，NEP）及胰岛素降解酶（Insulin-degrading enzyme，IDE） 的表达。结果：免疫组织化学检测显示IR组和IR-PIO组大鼠脑皮质Aβ42的蛋白表达明显高于NC组及NC-PIO组（P＜0.01），而IR-PIO组Aβ42的蛋白表达低于IR组（P＜0.05）；Western blotting检测IR组和IR-PIO组大鼠脑皮质APP、BACE1、PS-1的蛋白表达明显高于NC组及NC-PIO组（P＜0.01），与IR组相比，IR-PIO组以上各指标表达明显减低（P＜0.01）；各组间NEP表达差异无统计学意义（P＞0.05）；NC组及NC-PIO组IED的表达明显增强，与NC组相比，IR组IED的蛋白表达明显减弱（P＜0.01），而IR-PIO组蛋白的表达明显强于IR组。结论：胰岛素抵抗大鼠脑皮质可能通过上调BACE1，PS-1活性，促进Aβ42生成增加，同时抑制IED的活性减少了Aβ42的降解；吡格列酮能抑制BACE1，PS-1的表达，增强IED的活性，减少Aβ42生成及促进分解增加。
关键词：胰岛素抵抗；阿尔茨海默病；β分泌酶；γ-分泌酶；吡格列酮
阿尔兹海默病（Alzheimer s disease，AD）是发生于老年期的一种以认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。β淀粉样蛋白（Aβ）的选择性沉积是AD发病的中心环节。研究Aβ生成及其调控有助于阐明AD 的发病机制，对AD预防和治疗具有重要意义。 1 资料与方法 1.1 一般资料：实验动物为雄性Wistar大鼠，8周龄，体重200～220 g，购于山东大学动物实验中心。 1.2 药品及试剂：吡格列酮（江苏恒瑞医药有限公司），兔抗APP多克隆抗体（南京巴傲得生物科技有限公司），免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），小鼠抗PS-1单克隆抗体（北京博奥森生物技术有限工司），兔抗Aβ多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗、抗小鼠二抗（武汉博士德生物工程有限公司），兔抗NEP多克隆抗体、兔抗IED多克隆抗体及兔抗β-actin多克隆抗体（Santa Cruz公司），组织总蛋白抽提试剂盒、BCA浓度测定试剂盒、ECL发光液（上海申能博彩公司），胰岛素放免试剂盒（北京北方生物技术研究所）。 1.3 动物分组及模型制备：Wistar大鼠48只，从中随机选取正常对照组10只，标准啮齿类动物喂养，饮用自来水。余35只标准啮齿类动物喂养，饮用10%果糖水。4周后检测两种大鼠的空腹血糖（FBG）和胰岛素（FINS）。根据胰岛素抵抗指数IRI=FBG×FINS/22.5，如果模型组大鼠的IRI大于NC组的IRI均数加1.96个标准差者，则判断为IR大鼠，筛选出IR模型大鼠26只[1]。将其随机分为IR组和PIO组，各13只。在检测模型成功后，IR组及PIO组继续标准啮齿类动物饲料喂养，饮用10%的果糖水到实验结束，PIO组同时按吡格列酮10mg/（kg·d）灌胃给药，NC组与IR组同时灌服相同体积的生理盐水，共计12周[2]。 1.4 一般指标测定：常规监测血糖和胰岛素。 1.5 标本采集：吡格列酮干预12周后，断头取脑，部分以4%多聚甲醛固定，用于石蜡切片；部分组织放在－80℃保存，用于蛋白印迹的检测。 1.6 免疫组织化学法检测Aβ1～42：按照标准ABC标准染色方法， 石蜡切片，镜下拍照，用PBS代替一抗作阴性对照。用Imagine-pro plus6.0分析软件进行平均光密度半定量分析。 1.7 蛋白印迹法检测APP、BACE1、PS1、NEP和IED的表达：应用Alpha Imager 2000凝胶图像分析系统（美国 Alpha innotech公司产品）照相和条带密度扫描，按公式相对系数=目的带表达强度/β-actin，计算目的蛋白表达相对水平，以此进行半定量分析。 1.8
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