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[摘要]　目的:对草乌叶及其煎煮液中的乌头碱类药效组分进行定性分析,说明煎煮前后化学成分发生的变化。方法:电喷雾串联质谱分析法。结果:煎煮后草乌叶中的双酯型生物碱和三酯型生物碱均发生了水解。前者水解产物为苯甲酰乌头原碱和乌头原碱类生物碱;后者水解产物为3-乙酰乌头原碱类生物碱。结论:该法简便、快速、灵敏、特异性强,为草乌叶及复方制剂煎煮液中的生物碱类药效组分的分析提供了新方法。

[关键词]　草乌叶;电喷雾串联质谱;乌头碱类生物碱;药效组分[

为毛茛科乌头属植物北乌头Aconitum kusnezoffiiReichb.的干燥叶,功效清热解毒、止痛,为常用蒙药,记载于《无误蒙药鉴》、《晶珠本草》等历代蒙医学著作。收载于历版《中国药典》[1]以及《内蒙古药材标准》[2]和《中国医学百科全书(蒙医学)》等。蒙医临床上用于治疗热病、泄泻、腹痛、头痛、牙痛、淋巴结肿大、流行性感冒等。草乌叶主要活性成分为生物碱。此外,还含肌醇和鞣质。于海兰等[3]从草乌叶乙醇提取物分离到5个化合物。本研究利用电喷雾串联质谱技术分析草乌叶及其煎煮液中的生物碱,为研究草乌叶煎煮过程中化学成分的变化提供检测方法。

1　材料

LCQ型电喷雾质谱仪(美国Finnign公司)。草乌叶购于呼和浩特市药店,经张贵君教授鉴定为Aco-nitum kusnezoffiiReichb.的干燥叶。试剂为分析纯。质谱条件:毛细管温度: 180℃;喷雾电压5 kV;离子透镜补偿电压15 V;碰撞能20% ~24%;鞘气(氮气)流速60 arb;毛细管电压38 V;注射泵流速3μL·min-1。

2　方法

取草乌叶5 g,用20 mL无水乙醇浸提,乙醇提取液用甲醇稀释100倍后进行电喷雾质谱仪检测。取草乌叶5 g,用蒸馏水150mL煎煮3次,急火加热沸腾后中火加热,每次40 min,合并煎煮液,共得45 mL。然后在煎煮液中加入无水乙醇180 mL,24 h后过滤,乙醇溶液减压回收近干。将浸膏加蒸馏水50 mL溶解,以氨水调至pH 10,用氯仿萃取3次,每次30 mL,合并氯仿液。取氯仿液用乙醇稀释10倍,电喷雾质谱仪检测。

3　结果

3.1　草乌叶中生物碱的电喷雾串联质谱检测　草乌叶乙醇提取液的电喷雾全扫描质谱见图1A。根据质荷比可分为别那宁(m /z300~450)、双酯型生物碱(m /z600 ~ 665)和三酯型生物碱(m /z665~710)3个区域。根据文献[4-6]报道,可鉴定别那宁(m /z360)、乌头碱(aconitine,m /z646)、中乌头碱(mesaconitine,m /z632)、去氧乌头碱(deoxy-aconitine,m /z630)、次乌头碱(hypaconitine,m /z616), 10-OH-中乌头碱(10-OH-mesaconitine,m /z648)、3-乙酰乌头碱(3-acetyl aconitine,m /z688), 3-乙酰中乌头碱(3-acetylmesaconitine,m /z674)、3-乙酰-10-OH乌头碱(3-Acetylaconifine,m /z704),乙酰别那宁(11-Acetyl-lepenin,m /z402), 10-OH-乌头碱(aconifine,m /z662)和3-乙酰-10-OH中乌头碱(3-acetylbeiwutine,m /z690)。

3.2　草乌叶煎煮液中生物碱的电喷雾串联质谱检测　图1B是草乌叶煎煮液中生物碱的电喷雾全扫描质谱图,与草乌叶中的生物碱相比(图1A),发生了一些明显的变化:①苯甲酰中乌头原碱(m /z590)为基峰被检测;②检测到中乌头碱、乌头碱、10-OH-中乌头碱、10-OH-乌头碱4种双酯型生物碱,但它们的相对丰度较低;③检测到一系列双酯型生物碱的水解产物,通过它们的质荷比并与文献对照,确定它们为中乌头原碱(m /z486)、次乌头原碱(m /z470)、10-OH-中乌头原碱(m /z502)、苯甲酰乌头原碱(m /z604)、10-OH-苯甲酰乌头原碱(m /z620)、3-乙酰中乌头碱(m /z528)、3-乙酰乌头碱(m /z542)、3-乙酰-10-OH乌头碱(m /z558)和3-乙酰乌头原碱(m /z542);④未检测到三酯型生物碱。

4　讨论

电喷雾串联质谱方法分析生物碱具有灵敏度高、分析速度快和能部分表征结构的特点,适合分析草乌叶生物碱混合物,该法不适合分析结构完全未知的化合物,对已有研究基础的乌头类生物碱分析特别适用。

乌头碱等双酯型生物碱和3-乙酰乌头碱等三酯型生物碱都具有很强的药理活性和毒性,双酯型生物碱在水中加热水解为苯甲酰单酯型生物碱和毒性较低的乌头原碱。草乌叶经单煎后,单酯型生物碱苯甲酰中乌头原碱(m /z590)的质子化峰变为基峰,乌头碱等双酯型生物碱质子化峰相对降低,说明草乌叶中双酯型生物碱在煎煮过程中发生了进一步的水解,即煎煮过程也是草乌叶减毒增效的过程。

[参考文献]

[1]　中国药典[S].一部. 2005: 164.

[2]　中华人民共和国卫生部·中华人民共和国卫生部药品标准[S]·蒙药分册, 1997: 35·[3]　于海兰,贾世山.蒙药草乌叶中一个新二萜生物碱Beiwucine[J].药学学报, 2000, 35(3): 232.

[4]　王　勇,刘志强,宋凤瑞,等.白山草乌中二萜生物碱的电喷雾串联质谱分析[J].质谱学报, 2003, 23(3): 160.

[5]　ChangY, Abliz Z, LiL J, eta.l Study on fragmentation behaviorof5 /7 /6-type taxoids by tandem mass spectrometry[ J]. JMassSpectrom, 2001, 35: 1207.

[6]　王　勇,刘淑莹,刘志强,等.雪上一支蒿中乌头碱类生物碱的电喷雾串联质谱分析[J].分析化学, 2003, 31(2):