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【摘 要】 目的 视察大黄对慢性肾功能不全大鼠肾功能及肾机关TGF-β1和smad7表达的影响。方式 接纳腺嘌呤法竖立大鼠慢性肾功能不全模子，治疗组予以大黄（4 g/kg/d）灌胃。治疗4 周后，检测各组大鼠的24 小时尿卵白定量、肾功能，经过过程机关学及卵白印记视察肾机关TGF-β1和smad7的表达。效果 治疗组大鼠的24h尿卵白定量、肾功能光鲜明显增添（P＜0.01），而治疗组大鼠24 h尿卵白定量、肾功能较非治疗组裁减（P＜0.05）。非治疗组大鼠肾机关TGF-β1、smad7表达较正常组光鲜明显增添（P＜0.01）。结论 大黄可降低慢性肾功能不全大鼠24 小时尿卵白、肾功能水平，按捺肾机关TGF-β1和smad7表达。大黄对慢性肾功能不全的珍爱机制概略与降低肾脏TGF-β1和smad7表达有关。【关键词】 大黄；慢性肾功能不全；腺嘌呤；转化成长因子-β1；smad
[Abstract] Objective To study the effect of Dai Huang on glomerulosclerosis and expression of TGF-β1 and smad7 in rats with CRF. Methods Rats were divided into control group, not treated group and Dai Huang treated group with 20 rats in each group. The rats in the latter two groups were intragastric of Adenine. the treated group was fed with Dai Huang at a dose of 4g/(kg·d) for 4 weeks. Urine protein excretion, urea nitrogen and creatinine was measured. The expression of TGF-β1 and Smad7was measured. Results Compared with the control group, the not treated group showed higher urine protein excretion, urea nitrogen, creatinine(P<0.01)and expression of TGF-β1 and smad7. Conclusion Dai Huang can diminish urine protein excretion and prevent glomerulosclerosis in subtotally nephrectomized rats. This protective effect is presumed to be associated with its effect on expression of TGF-β1 and Smad7.
[Keywords] Dai Huang; Chronic renal failure; Adenine; TGF-β1; Smad7
大黄为蓼科植物掌叶大黄，现代药理学研究发现，大黄有抗血小板群集、降血脂、扫除氧自由基、晋升超氧化物例如化酶(SOD)的活性，减轻免疫炎症回响反映的功能，同事具有泻热通便、解毒消痈、行瘀通经功能。我们经过过程视察大黄对慢性肾功能不全大鼠的治疗，视察其对尿卵白渗出、肾功能的影响；并视察其对肾机关中转化成长因子β1（TGF-β1）、smad7的卵白表达及肾脏病理转变的影响，切磋大黄对慢性肾功能不全的疗效及浸染机制。
1 材料与方式
1.1 材料
湖北产中药材大黄。腺嘌呤(产物批号2007109)。兔抗TGF-β1、Smad7抗体；En Vision免疫组化试剂盒；BCA试剂盒。
1.2 执行动物分组和模子竖立
雄性SD大鼠60 只，7 周龄，体重190±20 g。顺应性饲养1 周，随机分为正常组20 只和腺嘌呤组40只。腺嘌呤组每日腺嘌呤300 mg/kg灌胃，6 周后以代谢笼留取24 小时尿液，眶内静脉采血，测定24 小时尿卵白定量、血尿素氮、血肌酐。检测发现悉数造模成功。随机分为2 组：非治疗组20 只，治疗组20 只。治疗组大鼠每日给予黄葵胶囊[2 g/kg·d]灌胃，同时正常组和非治疗组给予等量心理盐水灌胃。4周后悉数大鼠以代谢笼留取24 小时尿液，眶内静脉采血，测定24 小时尿卵白定量、血尿素氮及肌酐。大鼠处死后取部门肾机关置于10％中性甲醛中平稳，部门肾机关液氮留存用于卵白印迹杂交方式（Western blot）检测卵白表达。执行时代大鼠自由饮水、进食。
1.3 检测方式
1.3.1 尿卵白定量及肾功能测定
1.3.2 病理形态学视察
肾机关经10％中性甲醛平稳，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸腊、包埋、切片，厚3 µm，行HE染色，视察肾小球硬化及肾间质纤维化的水平。
1.3.3 卵白印记剖析
各组取约100 mg肾机关置于1 ml裂解缓冲液（含卵白酶按捺剂PMSF 100ug/ul，aprotinin 1 ug/ml，leupeptin 1 ug/ml），匀浆后冰浴30 分钟，然后4 度12000 g离心20 分钟。提取卵白后用BCA法测量卵白浓度。取等量卵白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，半干法转移至聚氟乙烯膜上，关闭液关闭，插手1：200稀释的TGF-β1抗体，4 ℃留宿。0.05％TBST洗膜3 次，ECL显影。
1.4 统计学处置责罚
计量资料接纳均数±尺度差透露表现，数据用SPSS 13.0软件包进行统计学处置责罚。各组间均数对照接纳单成分方差剖析，P <0.05感受有统计学意义(方差齐时用LSD法、方差不齐时用Tamhane法)。
2 效果
2.1 尿卵白定量转变
非治疗组和治疗组大鼠尿卵白渗出光鲜明显高于正常组(P <0.01)；治疗组大鼠尿卵白定量与非治疗组对照有所降低(P <0.05)，见表1。
2.2 血清生化指标转变
非治疗组和治疗组大鼠血肌酐光鲜明显高于正常组(P <0.01)；治疗组大鼠血肌酐与非治疗组对照有所降低(P <0.05)；尿素氮转变同血肌酐转变，见表1。
表1 各组大鼠尿卵白定量、血尿素氮、肌酐水平（ ）
组别 n 尿卵白定量(mg/d) 尿素氮(mmol/L) 肌酐（µmol/L）
正常组 20 9.24±2.16 7.26±1.03 48.26±9.36
非治疗组 20 169.36±27.69* 18.57±3.89* 119.41±15.86*
治疗组 20 89.1±17.34*▲ 14.18±5.34*▲ 80.64±12.25*▲
*与正常组对比，P<0.01，▲与非治疗组对比，P<0.05。
2.3 机关病理学改变
在HE染色中，非治疗组大鼠可见光鲜明显的肾小球增生，系膜增殖，肾小球毛细血管部门塌陷，球囊粘连，部门肾小球完全硬化，间质有炎细胞浸润，部门肾小管已萎缩，系膜外基质较着增添（图1）。治疗组与非治疗组对照，肾小球损伤、硬化轻，肾间质炎细胞浸润少，间质纤维化。
2.4 肾机关TGF-β1和smad7用卵白印记方式检测效果
治疗组和非治疗组大鼠对比TGF-β1表达下调，而smad7表达上调。见图2。
3 谈判
慢性肾功能不全是全数肾脏疾病但愿的配合终局，其本色是肾脏纤维化，严正威胁人类健康。此刻研究注解，TGF-β1和其受体轻贱的旗子记号转导因子Smad7卵白在促进肾小球纤维化及肾小管间质纤维化方面起主要浸染。
