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摘　要　用Pyrogallol-NBT等方法测定并分析荷瘤感染组,荷瘤非感染组及金葡菌及其L型感染组小鼠肿瘤或肝脏内超氧化歧酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量对小鼠生存的影响。结果发现荷瘤伴感染组小鼠的平均存活天数明显短于荷瘤非感染组及正常对照组,P<0.05。,共中16.7%荷瘤伴感染组小鼠同时伴有自发性肿瘤。金葡菌及其L型感染组23.3%引起自发性肿瘤。金葡菌及其L型感染组及荷瘤伴感染组小鼠肿瘤和肝脏内MDA含量明显高于荷瘤非感染组,P<0.05～0.01。98.7%荷瘤组小鼠肿瘤内SOD含量极少或为零。金葡菌及其L型感染组与正常对照组小鼠肝内SOD有明显差异,P<0.05。提示感染可能使小鼠体内SOD量减少,MDA量升高是引起小鼠发性肿瘤发生的重要原因之一。

关键词　金葡菌L型　荷瘤小鼠　超氧化歧酶　丙二醛

感染的细菌在体内外因素作用下可诱导为L型〔1〕。细菌及L型感染可引起炎症灶内巨噬细胞发生呼吸爆发和酶的化学反应,产生大量自由基,造成感染的组织或细胞损伤,甚至诱导肿瘤。通过对脂质过氧化终产物MDA和SOD活性的检测,以了解金葡菌及其L型感染患肺腺瘤小鼠体内MDA和SOD含量对小鼠生存的影响。

1　材料和方法

1.1金葡菌及其L型由本院微生物教研室提供。

1.2实验动物及肿瘤株　6～8周龄C57BL/6N小鼠(安徽医科大学动物中心提供)体重19.2±2.2g。雌雄为2∶1,随机分6组,每组15只。louse肺腺瘤由中科院上海动物实验中心提供。荷瘤伴金葡菌感染组(TS组)。荷瘤伴金葡菌L型感染组(TSL组)。金葡菌感染组(S组)。金葡菌L型组(SL组)。荷瘤非感染组(T组)。正常对照组(C组)。首先在TS、TSL、T组小鼠左前腋部皮下植入louse肺腺瘤组织块4mg。1周后见接种瘤组织处有小隆起,并分别于小鼠尾静脉注射金葡菌2×106/ml,金葡菌L型2×107/ml,每次注射0.2ml(亚致死量),每周1次,共12次。为防止对L型回复,每次注射金葡菌L型同时给予肌肉注射苯唑青霉素3000μ/0.2ml,每天2次,连续3天。荷瘤非感染组仅接种肿瘤,为非感染对照组,正常对照组每次仅于尾静脉注射无菌生理盐水。待小鼠自然死亡或被处死后,立即每组随机取8只小鼠的肿瘤组织及部分肝组织置-20℃冻存。待测定SOD和MDA含量。其余组织用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋、切片。

1.3样品制备　用分析天平称取冻存的瘤组织(或肝组织)置匀浆管内磨碎、混匀、制成10%匀浆。经提取后参照Pyrogallol-NBT法〔2〕检测SOD,并采用标准抑制曲线法(bSOD)查出样品的相应SOD含量,结果以μ/μg蛋白表示。按照uchiyoma〔3〕的方法取10%匀浆0.4ml测MDA含量,结果以nmol/100mg表示。

按照假设检验,采用t检验,方差分析和均数两两比较q检验等方法分析所得数据。

2　结　果

2.1感染对小鼠生存的影响　荷瘤伴感染组小鼠存活4～40天,平均25天,以TSL组为最短,平均仅存活22天。荷瘤非感染组小鼠存活21～55天,平均34.9天。金葡菌及L型感染组生存48～90天,平均80天。正常对照组小鼠存活90天被处死,经方差分析和均数两两比较q检验结果表明荷瘤伴感染组小鼠存活时间明显短于荷瘤非感染组、单纯感染金葡菌及L型组和正常对照组,P<0.05～0.01。

2.2感染对小鼠肿瘤内和肝脏内MDA含量的影响　经方差分析和均数两两比较q检验结果表明TSL组和TS组小鼠肿瘤内MDA含量明显高于T组,P<0.05～0.01,(表1)。金葡菌及L型感染组小鼠肝脏内MDA含量明显高于对照组,P<0.01,(表2)。

2.3感染组小鼠自发性肿瘤与MDA量的关系　荷瘤伴感染组共有5只(16.7%)小鼠除按种的肿瘤外,尚有自发性肿瘤发生。金葡菌及L型感染组有7只(23.3%)小鼠发生自发性肿瘤,(表3)。患自发性肿瘤小鼠肿瘤内MDA含量明显高于无自发性肿瘤小鼠,P<0.05～0.01。荷瘤非感染组和正常对照组小鼠体内MDA含量较低,亦无自发性肿瘤。

2.4感染对小鼠肿瘤内和肝脏内SOD含量的影响　除TSL组1只(1.3%)小鼠肿瘤内SOD含量(200μ/μg)较高外,其余(98.7%)小鼠肿瘤SOD含量均极低或为零(明显低于标准曲线)。金葡菌及L型感染组小鼠肝脏内SOD含量与对照组亦有明显差异,P<0.01(表4)。

2.5金葡菌及L型感染小鼠肝脏的病理变化　金葡菌及L型感染组各有11只及13只小鼠肝细胞有点状坏死和间质内慢性炎细胞浸润,且主要以淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润,其中SL组有2只小鼠患有肝细胞肝癌;TSL组及TS组各有12只及11只小鼠肝脏慢性间质性炎症,其中3只小鼠患肝癌。对照组仅1只小鼠肝脏内有小灶性淋巴细胞浸润,经卡方检验,P<0.05。表明金葡菌及L型感染对小鼠肝细胞的损害比对照组严重。

3　讨　论

本文着重了解金葡菌及L型感染对C57BL/6N小鼠肝细胞的损害情况及致瘤的可能原因。荷瘤伴感染组小鼠存活时间明显短于荷瘤非感染组、金葡菌及其L型感染组和正常对照组,P<0.05。可能与荷瘤伴感染组小鼠肿瘤内MDA含量增高有关,其中TS及TSL组中有5只(16.7%)小鼠除接种肿瘤外,尚有自发性肿瘤(1只为良性,4只为恶性肿瘤)。金葡菌及L型感染组中有7只小鼠有自发性肿瘤(3只良性肿瘤,4只恶性肿瘤)。其体内MDA含量明显高于无自发性肿瘤小鼠P<0.05～0.01。而MDA含量较低的T组和C组均无自发性肿瘤发生。

组织学检查结果表明金葡菌及其L型感染荷瘤组及非荷瘤组小鼠几乎有不同程度肝细胞点状坏死,小鼠肝脏间质或坏死灶周围有不等淋巴细胞作单核巨噬细胞浸润。由于细菌及其L型在感染过程中引起巨噬细胞反应,巨噬细胞在吞噬和消化异物时发生呼吸爆发和酶化学反应,生成大量的O2活性氧及一系列脂质过氧化终产物(MDA)〔4〕。通常这些产物需借助于SOD来清除,因SOD具有较强的抗氧化、抗肿瘤作用。而所有荷瘤组小鼠肿瘤内SOD含量均极低或为零,对MDA清除能力明显降低,导致体内MDA过量蓄积。有报道MDA可引起广泛的损伤效应,可导致细胞及亚细胞器膜结构破坏和功能紊乱,可使DNA断裂、复制或转录错误,不仅直接引起细胞损伤,也是引起细胞突变或癌变的重要原因之一〔5〕。由于感染使体内SOD含量降低,MDA含量增加,导致体细胞损伤、突变和癌变的危险性也随之增高。