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摘要：目的 观察丹柏四逆颗粒剂抗炎免疫作用。方法 采用小鼠二甲苯所致耳廓肿胀度实验；小鼠棉球肉芽肿实验；小鼠体内碳粒廓清功能实验；小鼠胸腺、脾脏指数实验；鸡红细胞所致小鼠溶血素抗体生成实验(比色法)；DNCB 所致小鼠迟发型皮肤过敏反应(DTH)(伊文思蓝比色法)实验。结果 本方可抑制小鼠二甲苯所致耳廓肿胀[原药材 9、18g/(kg·d),ig]和抑制小鼠棉球肉芽肿[4.5g/(kg·d),ig]；各剂量组均可提高小鼠碳粒廓清功能且对小鼠胸腺、脾脏重量均无影响；可促进小鼠溶血素抗体生成[9g/(kg·d),ig]和抑制 DNCB 所致小鼠 DTH[4.5、9g/(kg·d),ig]。结论 丹柏四逆颗粒剂有一定抗炎及免疫调节作用。

关键词：四逆散；药理作用；抗炎；免疫调节

丹柏四逆颗粒剂是在四逆散基础上加味经提取加工而成的中药制剂。该方是川南地区治疗急腹症的经验方,在临床应用多年,疗效较好,为此我们对其开展了一系列研究。现将其抗炎免疫作用实验结果报道如下。

1 实验材料

1.1 药品及仪器丹柏四逆颗粒剂,1g 颗粒剂含原药材 3g,成都中医药大学制剂教研室提供。751-GW 型分光光度计,普惠上海分析仪器有限公司。

1.2 动物昆明种一级小鼠,成都中医药大学实验动物研究中心提供。

2 方法与结果

2.1 丹柏四逆颗粒剂对小鼠二甲苯所致耳廓肿胀度的影响将体重 23～25g 雄性小鼠 45 只,随机分为 5 组,分别给药。给药 1h 后,将 50μL/只二甲苯滴于小鼠右耳,1h 后将小鼠处死,打下左右耳片,称重,求同一小鼠左右耳片重量差,作基金项目：四川省科委科研基金资助项目(99C151)为肿胀度。结果见表 1。

2.2 丹柏四逆颗粒剂对小鼠棉球肉芽肿的影响将体重20～22g雄性小鼠50只,随机分为5组,将均一灭菌棉球从小鼠左蹊部植入皮下。手术当日开始给药,每天 1次,第 7 天处死小鼠,取出棉球,烘干称重。求得肉芽肿重量。

2 3 丹柏四逆颗粒剂对小鼠体内碳粒廓清功能的影响将体重 15～18g 小鼠 50 只,雌雄各半,随机分为 4 组,分别给药,每天 1 次,于第 7 天末次给药 1.5h 后,鼠尾静脉注射1∶5 生理盐水稀释墨 0.1mL/10g。注射后 1、11min,分别从2004 年 2 月第 11 卷第 2 期 中国中医药信息杂志 ·121·表 2 对小鼠棉球肉芽肿的影响(—x±s)组别 n 给药途径 剂量(g/kg) 肉芽肿重量(mg)生理盐水组 8 ig 12.19±1.95丹低组 7 ig 4.5 9.80±1.83*丹中组 8 ig 9 12.09±1.76丹高组 10 ig 18 10.75±2.31地塞米松组 10 ip 0.005 5.26±0.72***其眼眶后静脉丛取血 20μL,加入 2mL 0.1% NaCO3溶液中,在680nm 波长下比色,记录血样吸收度(A)。处死小鼠,取肝、脾称重。计算廓清指数 K 值和吞噬指数α值。结果见表 3。

2 4 丹柏四逆颗粒剂对小鼠胸腺、脾脏重量的影响将体重 15～18g 雄性小鼠 60 只,随机分为 5 组。分别给药 7d,每天 1 次,末次给药后 24h 处死,称重。摘胸腺及脾脏称重,计算胸腺指数、脾脏指数。结果见表 4。

2.5 丹柏四逆颗粒剂对鸡红细胞所致的溶血素抗体生成的影响(比色法)在鸡血中加入5 倍体积的灭菌 Alsever 溶液,离心洗涤,用生理盐水配成 5%鸡红细胞悬液(V/V)。补体的制备：将 3 只豚鼠心脏采血各 3mL,静置后分离血清,用 10 倍生理盐水稀释。将15～18g 雌雄各半小鼠 72 只,随机分为 5 组。分别给药 9d,每天1 次,给药2d 后,每鼠腹腔注射鸡红细胞悬液0.2mL,进行免疫。免疫后第 7 天,摘眼球取血,离心,取血清稀释 100 倍。取稀释血清 1mL 与鸡红细胞悬液 0.5mL、补体稀释液 0.5mL 混合,37℃恒温水浴中温浴 30min,0℃中止反应。离心,取上清液于分光光度计 540nm 处比色,测吸光度(A),另设不加血清的空白对照。以 A值作为判定血清溶血素的指标。结果见表 5。

2.6 丹柏四逆颗粒剂对 DNCB 所致迟发型皮肤过敏反应(DTH)的影响(伊文思蓝比色法)将 15～18g 小鼠 50 只,雌雄各半,随机分为 5 组。首次给药后,于鼠颈部皮肤滴 10% DNCB 丙酮溶液 10μL/只致敏。每日给药1 次,11d 后,在小鼠腹部皮肤上涂2.5% DNCB 丙酮溶液20μL/只进行攻击。24h 后,每鼠尾静脉注射 1%伊文思蓝10mL/kg。30min 后,处死动物,剪下腹部蓝染皮肤,用1∶1丙酮和生理盐水混合液浸泡 24h,离心取上清液,在610nm 处测定吸光度(A)。以 A 值表示迟发型过敏反应的强度。结果见表 6。

3 讨论

丹柏四逆颗粒剂组方突出了治疗急腹症“八法”中清热解毒、活血化瘀、理气开郁的治法,以祛邪为主。实验表明, 丹柏四逆颗粒剂能降低二甲苯所致的小鼠耳廓渗出、水肿程度,有利于减轻急性炎症时脏器水肿、阻塞的病理改变。低剂量时,抑制小鼠棉球肉芽肿的增生,可减轻由于受损较重引起的纤维化的形成。

丹柏四逆颗粒剂能提高小鼠碳粒廓清功能,提高单核吞噬细胞系统功能,其在机体抗病原微生物感染中起着关键作用。巨噬细胞具有强大吞噬和清除异物功能,在清除细菌内毒素时起主导作用,且能作为抗原呈递细胞,是诱发免疫应答的先决条件。吞噬细胞多在炎症晚期出现,在急性炎症晚期可清除炎症部位中性粒细胞等细胞残骸[1]

,清除炎性刺激因子,减少肉芽肿形成,故单核吞噬细胞功能的提高可能是该制剂抑制肉芽肿作用中一个环节。另外,单核巨噬细胞和白细胞在吞噬病原微生物过程中,溶酶体释放多种酶类,亦作为炎性介质引起局部及全身的炎性反应,被吞噬的细菌裂解后产生毒素,可引起全身中毒症状如发热等。本制剂既能增强吞噬细胞功能,又能抑制由此而产生的炎性及中毒反应(本方前期实验表明有解热作用)。而抗生素单纯抑菌、杀菌,刺激免疫现象发生,同时又产生一系列超敏反应、变态反应[2]。

本制剂能够提高小鼠溶血素抗体生成量,有利于中和细菌外毒素,增强调理作用,使细菌易被吞噬细胞吞噬。在胆道严重感染时,血中 IgG、IgA 及补体的变化与病情及预后指标变化相平行,其水平下降将损害宿主防御机能[3]。本制剂抑制DNCB 引起的小鼠迟发型皮肤过敏反应,能抑制 T 细胞介导的特异性细胞免疫应答,从而抑制由此引起的组织慢性炎症,可能是其抑制肉芽肿的另一环节。另外,实验表明,本制剂对免疫器官胸腺、脾脏的重量无影响,说明其调节免疫功能只作用于某一环节,而并非是非特异性的。

丹柏四逆颗粒剂对免疫功能的调节作用,提示与免疫增强不呈正相关,它既能提高非特异性免疫中吞噬细胞功能及·122· 中国中医药信息杂志 2004 年 2 月第 11 卷第 2 期冰片对大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响刘养凤1,张军平2,张伯礼1,范 祥1,于春泉1,李玉红1,王晓晖1,姜智浩1(1.天津中医学院,天津 300193；2.天津中医学院第一附属医院,天津 300193)摘要：目的 观察天然冰片对大鼠下丘脑单胺类神经递质 NE、E、5-HT、DA 含量的影响,同时进行其时效和量效关系的观察,初步探讨冰片的作用靶点和作用机理。方法 将 168 只 Wistar 大鼠随机分组,分别灌服生理盐水、1%CMC-Na,以及高、中、低剂量的冰片,每天灌胃 2 次,在 0、45min、24h、72h、120h 不同时相,用高效液相-电化学法检测大鼠下丘脑单胺类神经递质 NE、E、5-HT、DA 含量。结果 灌服冰片 45min 后,冰片中、高剂量组对下丘脑 NE 含量有显著降低作用(P <0.05)；对下丘脑 E 的含量,中、高剂量组和 CMC-Na 组相比有明显的降低作用(P <0.05)；连续灌胃后,不同时相冰片各组下丘脑 NE、E 含量和 CMC-Na 组相比,继续呈现不同程度的下降作用,但对下丘脑 5-HT 无显著影响；在连续灌胃 5d 后,对 DA 含量有显著降低作用(P <0.05)。对大脑皮层乙酰胆碱含量无显著影响,对单胺氧化酶含量有升高的趋势,但除在 24h 时相,冰片中、高剂量组差异有显著性意义外(P <0.05),其余时相无显著差异。结论 冰片在各个时相均有降低下丘脑 NE、E 含量的作用,而且随着剂量的递增,对下丘脑中的 NE、E 含量有逐渐降低的趋势,表现出一定的量效关系。推测芳香开窍中药冰片的药理作用方式可能通过调节中枢神经组织中单胺类神经递质含量达到稳态平衡有关。