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提　要　本研究利用两歧型双歧杆菌提取的细胞壁成份，在体外与K562健株细胞系和从手术切除的新鲜肿瘤组织共同培养，结果双歧杆菌细胞壁对K562细胞无杀伤活性，而对新鲜肿瘤细胞显示一定的低杀伤性，并且与细胞壁浓度呈正相关，我们认为双歧杆菌细胞壁不具有直接杀伤肿瘤作用，只有通过激活各种效应细胞发挥抗肿瘤活性。

关键词　双歧杆菌细胞壁　抗肿瘤　体外

大量文献表明双歧杆菌在体内有一定的抗肿瘤效应，但其抗肿瘤机理大都认为与该菌在体内代谢产生的物质有关，至于该菌细胞壁抗肿瘤的研究，国内报道较少，本研究用粗制双歧杆菌细胞壁进行了体外抗肿瘤研究。

材料与方法

1.1　双歧杆菌：为两歧型双歧杆菌，接种于固体和液体培养基上，大量收获细菌。

双歧杆菌细胞壁的提取：参照文献[1],双歧杆菌经超声破碎、溶菌酶消化、DNase、SDS等处理后冷冻干燥，作为粗制细胞壁，称重。

肿瘤细胞：K562为红白血病细胞系，新鲜肿瘤细胞组织取自外科切除的食管癌组织，在无菌RPMI-1640中去除外周脂肪和筋膜组织，剪碎，过120目不锈钢筛网制备单个细胞悬液，台盼兰染色示活性>98%,作为新鲜肿瘤细胞。

实验方法：将新鲜肿瘤细胞和K562细胞用含15%新生小牛血清（杭州四季青产品）的RPMI-1640调成一定细胞浓度，加入96孔培养板（Corning产品）中，0.2ml/孔，然后加入粗制双歧杆菌细胞壁，使终浓度分别为1,5,20μg/ml,每一实验条件设8孔，采用MTT法[2]测定各孔的杀伤率，杀伤率=（各实验孔OD值-最大杀伤孔OD值/（空白对照孔OD值）-最大杀伤孔OD值）×100%。

结　果

2.1　双歧杆菌细胞壁对K562细胞的杀伤作用：不同浓度双歧杆菌细胞壁对K562细胞均无杀伤作用。

双歧杆菌细胞壁对新鲜肿瘤细胞的杀伤作用（见附表）附表　双歧杆菌细胞壁对新鲜肿瘤细胞的杀伤作用（%）细胞壁浓度细胞浓度1041055×1051μg/ml 18.0 15.4 11.55μg/ml 22.3 17.2 12.620μg/ml 29.1 18.4 14.6。

3　讨　论

双歧杆菌是机体肠道中的正常菌群之一，大量文献已表明该菌通过在机体内代谢产生各种生物活性物质可激发机体的抗肿瘤效应[3-4]。1985年Sekine[5]报道双歧杆菌细胞壁成份在小鼠体内可发挥一定的抗肿瘤作用，因而使人们推测该菌除在体内代谢产生的各种有益物质如乳酸、醋酸具有增强机体免疫力，抵御外界有害微生物入侵作用外，该菌的细胞壁成份中是否具有一定的抗肿瘤效应物质。在本研究中我们应用粗制的双歧杆菌细胞壁进行的实验表明，细胞壁对健株的K562细胞无杀伤作用，而与来自新鲜切除的肿瘤组织共同培养时表现出一定的杀瘤活性，并且与细胞壁的浓度呈正相关，而与肿瘤细胞的浓度呈负相关，我们认为主要是由于肿瘤组织中有可能浸润一定量的淋巴细胞，即肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），在与双歧杆菌细胞壁共同培养时激发这些效应细胞从而发挥一定的杀瘤活性。本研究结果表明：1.双歧杆菌细胞壁不具有直接杀瘤活性；2.细胞壁有可能作为有效的免疫增强剂，在体内通过激发各种生物活性细胞发挥抗肿瘤作用。至于双歧杆菌细胞壁中的活性物质及在体内的抗肿瘤研究有待以后进一步研究。